上海生物制品宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證
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發(fā)布時(shí)間:2025-08-29
宿主細(xì)胞殘留蛋白(HCP)檢測(cè)是生物制品質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié),采用基于抗體的免疫學(xué)方法(如ELISA)。然而,不同試劑盒之間的檢測(cè)結(jié)果常存在明顯差異,關(guān)鍵原因在于其依賴的關(guān)鍵組分——HCP校準(zhǔn)品和檢測(cè)抗體——本身制備與表征的高度可變性。校準(zhǔn)品作為定量的基準(zhǔn),其復(fù)雜性極大。不同供應(yīng)商在制備時(shí)使用的細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)及表達(dá)條件、宿主蛋白提取純化工藝(例如目標(biāo)產(chǎn)物去除策略)差異明顯,導(dǎo)致校準(zhǔn)品的組成、代表性及穩(wěn)定性各不相同。同樣,檢測(cè)抗體(尤其是多抗)通過(guò)免疫動(dòng)物獲得,其特異性與覆蓋度受免疫原、動(dòng)物應(yīng)答個(gè)體差異、免疫方案及后續(xù)抗體篩選/純化過(guò)程的影響巨大,不同批次或來(lái)源抗體的識(shí)別譜(如對(duì)不同HCP的親和力、對(duì)低豐度蛋白的靈敏度)存在本質(zhì)差別。正是這些關(guān)鍵組分固有的明顯變異度,導(dǎo)致不同試劑盒對(duì)同一樣本的檢測(cè)結(jié)果在數(shù)值上、甚至特定HCP的檢出能力上可能出現(xiàn)較大偏差。因此,為確保檢測(cè)結(jié)果真實(shí)反映自身產(chǎn)品的HCP殘留情況,企業(yè)應(yīng)結(jié)合自身產(chǎn)品特性和工藝,對(duì)不同試劑盒進(jìn)行詳細(xì)的平行比對(duì)與適用性評(píng)估,以篩選出匹配度較高的檢測(cè)方案。
生物制品臨床申報(bào)需提交 HCP 抗體覆蓋率數(shù)據(jù),否則可能面臨監(jiān)管發(fā)補(bǔ)要求。上海生物制品宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證
大腸桿菌具有遺傳性狀清晰,易于培養(yǎng)和控制,表達(dá)水平高,成本低,周期短等特點(diǎn),是優(yōu)先的經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng),K-12系列和B系列菌株是工業(yè)規(guī)模上常用于生物工程的E.coli細(xì)菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株,可用于大量生產(chǎn)質(zhì)粒DNA并進(jìn)一步制備細(xì)胞基因治療產(chǎn)品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株,如BL21,更適用于高效轉(zhuǎn)染表達(dá)載體和常規(guī)蛋白的表達(dá),如:病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細(xì)胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物針對(duì)這兩種菌株的特點(diǎn),分別開發(fā)了E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測(cè)試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測(cè)試劑盒。
江蘇生物制品宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)免疫策略宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)對(duì)保障生物制品安全性和有效性至關(guān)重要。
宿主細(xì)胞蛋白(HCP)作為生物制品中來(lái)源于細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì),具有明顯的異質(zhì)性特征。其復(fù)雜性體現(xiàn)在三個(gè)方面:①理化特性差異:HCP涵蓋胞內(nèi)及分泌蛋白,涉及關(guān)鍵生理功能,具有涵蓋區(qū)間大的等電點(diǎn)(pI 3-11)、分子量范圍(5-250kDa)及疏水性;②上游工藝影響:不同發(fā)酵工藝(如細(xì)胞株、培養(yǎng)條件)誘導(dǎo)獨(dú)特的翻譯后修飾(PTM),導(dǎo)致HCP總量與生化復(fù)雜性增加;③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾:抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會(huì)選擇性殘留特定HCP,且產(chǎn)物形式(如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達(dá))直接影響HCP殘留譜。針對(duì)特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測(cè)方案是準(zhǔn)確監(jiān)控宿主細(xì)胞蛋白殘留的關(guān)鍵。
在宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)的分析方法中, ELISA方法是廣泛應(yīng)用的,并作為QC日常放行檢測(cè)的主要手段。ELISA方法相對(duì)簡(jiǎn)單、精度良好,方便設(shè)定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范,適用于產(chǎn)品開發(fā)和過(guò)程控制;但ELISA方法檢測(cè)依靠抗原抗體特異性結(jié)合,因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關(guān)重要。無(wú)論是商品化ELISA試劑盒,還是自制的多克隆抗體,如果抗體的特異性和適用性不夠高,都有可能帶來(lái)HCPs漏檢的風(fēng)險(xiǎn),從而對(duì)生物制品質(zhì)量安全帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)。除此之外,ELISA檢測(cè)HCPs使用多克隆抗體,無(wú)法針對(duì)性的提供高風(fēng)險(xiǎn)HCPs殘留蛋白真實(shí)存在情況。
HCP具有異質(zhì)性,體現(xiàn)在分子本身的多樣性以及和工藝相關(guān)的變異性。
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)是抗體、重組蛋白、疫苗等生物制品生產(chǎn)中普遍使用的動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。在使用CHO宿主生產(chǎn)過(guò)程中,不可避免的會(huì)引入宿主細(xì)胞蛋白(HCP)雜質(zhì),即使較低殘留水平下,HCPs也會(huì)存在免疫原性,降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等的風(fēng)險(xiǎn)。因此需對(duì)生物制品中殘留的HCP進(jìn)行定量分析,以保證純化工藝的一致性和終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK®CHO HCP檢測(cè)試劑盒實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵試劑全國(guó)產(chǎn)化,采用CHO 細(xì)胞(K1&S)補(bǔ)料分批培養(yǎng)工藝制備HCPs 免疫綿羊,獲得專門的抗體,用于CHO細(xì)胞系表達(dá)的生物制品(單抗,重組蛋白,疫苗等)中宿主細(xì)胞蛋白的殘留檢測(cè)。本試劑盒操作步驟少、快速、檢測(cè)專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠。
深入分析宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)的數(shù)據(jù),能為生產(chǎn)工藝的優(yōu)化調(diào)整提供明確方向。
廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)方法開發(fā)湖州申科宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)產(chǎn)品幾乎覆蓋抗體、重組蛋白、疫苗及細(xì)胞基因治療領(lǐng)域的頭部企業(yè)。上海生物制品宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證
湖州申科生物建立了專業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)平臺(tái),利用 ELISA 方法分析宿主細(xì)胞蛋白總量,嚴(yán)格把控CV差異和回收率結(jié)果,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果真實(shí)性,開發(fā)的試劑盒或抗體具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)。在技術(shù)服務(wù)方面,平臺(tái)提供兩類關(guān)鍵支撐:一是覆蓋多種宿主(包括CHO、E.coli,酵母等)的殘留HCP檢測(cè)服務(wù),直接輸出蛋白殘留量及樣品回收率數(shù)據(jù);二是配套的樣品適用性驗(yàn)證體系,通過(guò)基質(zhì)定量下限驗(yàn)證、樣品稀釋度驗(yàn)證、準(zhǔn)確性驗(yàn)證及精密度驗(yàn)證(含重復(fù)性與中間精密度)等多維度檢測(cè)方案,結(jié)合完整的試劑盒性能報(bào)告,確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可溯源性,為生物制品工藝雜質(zhì)控制提供可靠保障。
上海生物制品宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證