廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-08-25

宿主細(xì)胞蛋白來源中往往同時(shí)存在核酸,胞膜脂類,培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會(huì)干擾總蛋白的檢測準(zhǔn)確性,需要在檢測之前進(jìn)行純化前處理,同時(shí)對(duì)總蛋白檢測方法進(jìn)行方法學(xué)確認(rèn)。HCP是一種多蛋白質(zhì)的混合物,總蛋白定量方法之間檢測結(jié)果會(huì)存在一定程度的差異,這也是導(dǎo)致HCP免疫檢測方法結(jié)果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結(jié)果差異較大,一般同時(shí)采用2種以上經(jīng)過確認(rèn)的方法檢測,再取均值??偟鞍讬z測方法的定量限一般只能達(dá)到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產(chǎn)品校準(zhǔn)品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產(chǎn)品校準(zhǔn)品中存在稀釋誤差,需要對(duì)產(chǎn)品校準(zhǔn)品進(jìn)行重新標(biāo)定賦值。
定制化宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測試劑盒抗原校準(zhǔn)品更具代表性,減少HCP漏檢和定量誤差。廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā)

廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā),宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測

湖州申科生物結(jié)合不同宿主實(shí)際的生產(chǎn)工藝,通過高質(zhì)量免疫原和 HCP 多抗的標(biāo)準(zhǔn)化制備流程,獲得高效價(jià)、高覆蓋率的抗體,開發(fā)了適用于大腸桿菌表達(dá)菌 (BL21) 生產(chǎn)工藝、克隆菌堿裂法提取質(zhì)粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒, 適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產(chǎn)品等的HCP定量監(jiān)測。為確保 ELISA 對(duì)HCP定量檢測的準(zhǔn)確性,須對(duì) HCP 抗體覆蓋率進(jìn)行驗(yàn)證。湖州申科抗體覆蓋率平臺(tái)采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物(洗滌劑、鹽、脂質(zhì)、酚類和核酸等離子污染物),并設(shè)置2D 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)控,同時(shí)以陰性抗體為對(duì)照平行試驗(yàn),以提高結(jié)果準(zhǔn)確度。
成都宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法對(duì)比湖州申科自主研發(fā)IMBS抗體覆蓋率檢測法及低豐度HCP富集技術(shù),合作完成多項(xiàng)課題并發(fā)表成果。

廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā),宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測

為什么定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測的優(yōu)先選擇?原因之一是來源特定工藝下抗原及校準(zhǔn)品更具代表性。不同生物制品的上游生產(chǎn)工藝,包括培養(yǎng)基,培養(yǎng)條件,收獲時(shí)機(jī)等差異,均會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生的HCPs的蛋白種類、豐度以及蛋白翻譯修飾不同,因此進(jìn)入到下游純化工藝的HCP類型也隨之發(fā)生變化,尤其是與藥物主成分共純化的HCPs會(huì)成為優(yōu)勢蛋白而存在于藥物原液或制劑中。HCP定制化ELISA檢測試劑盒通常選取實(shí)際生產(chǎn)工藝中上游發(fā)酵后的樣品進(jìn)行抗原及校準(zhǔn)品的制備,所制備的校準(zhǔn)品可以較為充分地反映實(shí)際生產(chǎn)工藝中的HCP,減少因抗原校準(zhǔn)品種類不足導(dǎo)致的漏檢以及定量不準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)。

大腸埃希氏菌(Escherichia coli,E. coli )又稱大腸桿菌,其作為模式微生物被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究中。大腸桿菌是表達(dá)藥用異源蛋白的常用微生物,在被批準(zhǔn)的藥用蛋白中,大約30%的產(chǎn)品以大腸桿菌作為表達(dá)宿主菌。與其他表達(dá)平臺(tái)一樣,盡管下游復(fù)雜的純化步驟已經(jīng)去除了大量的雜質(zhì),但終產(chǎn)品中仍會(huì)存在HCP殘留風(fēng)險(xiǎn),必須對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制,使其符合放行標(biāo)準(zhǔn)。湖州申科生物E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測試劑盒用于大腸桿菌表達(dá)菌株BL21來源的宿主細(xì)胞蛋白定量檢測,適用于重組蛋白類產(chǎn)品的工藝中間品和原液類樣品,如白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(rhIFN)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、腫瘤壞死因子(rhTNF)、促生長因子(EGF/FGF/PDGF)等。試劑盒檢測步驟少,快速,專一性強(qiáng),性能穩(wěn)定可靠。
宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測對(duì)保障生物制品安全性和有效性至關(guān)重要。

廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā),宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測

在宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測的分析方法中, ELISA方法是廣泛應(yīng)用的,并作為QC日常放行檢測的主要手段。ELISA方法相對(duì)簡單、精度良好,方便設(shè)定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范,適用于產(chǎn)品開發(fā)和過程控制;但ELISA方法檢測依靠抗原抗體特異性結(jié)合,因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關(guān)重要。無論是商品化ELISA試劑盒,還是自制的多克隆抗體,如果抗體的特異性和適用性不夠高,都有可能帶來HCPs漏檢的風(fēng)險(xiǎn),從而對(duì)生物制品質(zhì)量安全帶來風(fēng)險(xiǎn)。除此之外,ELISA檢測HCPs使用多克隆抗體,無法針對(duì)性的提供高風(fēng)險(xiǎn)HCPs殘留蛋白真實(shí)存在情況。
湖州申科系列HCP檢測產(chǎn)品均進(jìn)行了校準(zhǔn)品的表征分析,抗體覆蓋率分析。CHO宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā)

為確保HCP ELISA檢測產(chǎn)品符合申報(bào)要求,湖州申科在試劑盒的全流程開發(fā)方案嚴(yán)格按照法規(guī)要求。廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā)

湖州申科采用免疫磁珠分離(IMBS)結(jié)合 2D 電泳或者 LC-MS 的方法評(píng)估抗體覆蓋率。IMBS主要流程包括多克隆抗體與磁珠偶聯(lián),磁珠未結(jié)合位點(diǎn)的封閉,HCP樣本與結(jié)合抗體的磁珠共同孵育,此過程中 HCP 抗體結(jié)合可以識(shí)別的 HCP,而未識(shí)別的 HCP 則通過后續(xù)洗滌步驟去除,再通過低 pH等洗脫條件收集抗體捕獲的HCP。該方法擁有 AAE(Antibody Affinity Extraction)免疫層析柱分離的所有優(yōu)點(diǎn),同時(shí)免疫磁珠可以在懸浮的條件下與 HCP樣品充分混勻結(jié)合,HCP結(jié)合效果更佳,由于采用磁珠吸附可以減少 HCP與填料的非特異性吸附,提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。
廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測方法開發(fā)