MRC-5宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒

來源: 發(fā)布時間:2025-08-29

各國法規(guī)要求必須對生物藥品進行分析和純化,以將宿主細胞蛋白HCP降低到可接受的水平;即使終產品中痕量的宿主細胞蛋白HCP到達患者體內,尚不清楚特定的殘留蛋白質雜質是否會影響藥物的穩(wěn)定性或免疫原性。關于HCP的限量標準,美國藥典推薦值為終產品的HCP水平1-100 ng/mg;中國藥典各論中E.coli菌體HCP應不高于蛋白質總量的0.10% (1000 ng/mg),CHO細胞HCP應不高于蛋白質總量的0.05% (500 ng/mg),假單胞菌HCP應不高于蛋白質總量的0.02% (200 ng/mg)。
定制化宿主細胞蛋白殘留檢測試劑盒產生的HCP抗體特異性更好,能檢出高風險HCP。MRC-5宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒

MRC-5宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒,宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測

宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估實驗操作復雜,需要在建立實驗方法階段對關鍵步驟進行充分的驗證,以證明實驗方法的穩(wěn)健性。湖州申科開發(fā)的基于磁珠捕獲的IMBS方法(immunomagnetic beads separation),在開發(fā)過程中對關鍵步驟進行了充分驗證,相關結果經過專業(yè)評審,驗證的內容如下(部分):①方法優(yōu)化:針對磁珠與抗體的偶聯比例、洗滌液體積、洗滌次數、洗脫次數等關鍵參數進行優(yōu)化驗證,以保證方法的穩(wěn)健性;②過程質控:二維電泳存在實驗步驟多,時間跨度長,中間步驟難以控制等缺陷,因此在等電聚焦實驗部分設計了熒光標記多肽,可快速判斷等電聚焦效果。在SDS-PAGE電泳的兩側增加40 ng銀染質控,用于銀染顯色的控制;③方法重復性:針對2D分析以及LC-MS分析進行重復性確認,其中2D分析方法重復性可達到80%以上,LC-MS分析方法可到90%以上;④上樣量優(yōu)化:針對2D分析以及LC-MS分析進行上樣量確認,消除上樣量差異對檢測結果帶來的影響;⑤假陽性:排除樣品與陰性抗體之間是否存在非特異性結合,確定IMBS實驗所設定的步驟、參數是否有假陽性結果存在。
廣東畢赤酵母宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測HCP 定制化開發(fā)需構建成熟平臺、技術實力、合規(guī)體系、穩(wěn)定供應、專業(yè)團隊及成功案例的全維度支撐體系。

MRC-5宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒,宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測

宿主細胞蛋白(HCP)ELISA定制化開發(fā)平臺需要具備完善的開發(fā)體系,可靠的技術平臺,專業(yè)的開發(fā)團隊,以實現長期穩(wěn)定供應符合法規(guī)要求的試劑盒。其中校準品作為關鍵原材料,其良好的穩(wěn)定性和溯源保障對生命周期至關重要。為確保校準品的穩(wěn)定,一般采用凍干工藝制備校準品,用單因素方差分析方法對校準品進行均一性評估,采用法規(guī)規(guī)定的蛋白定量方法進行校準品的賦值,并溯源至國家標準品(如有)或BSA國家標準品。其次,由于HCPs是復雜的多分析物,為制備盡可能高覆蓋率的抗體,覆蓋工藝下特有的高風險HCPs,需采用可靠的免疫策略。得到符合性能要求的抗體后,需采用經過驗證的可靠的2D或LC-MS方法進行抗體覆蓋率的表征,以確保抗體可以充分覆蓋各實際工藝下產生的HCPs。得到了具有代表性的抗原和性能優(yōu)良的抗體后,便是ELISA檢測體系的開發(fā),主要包括原輔料的篩選和制備研究、各組分工藝及反應體系研究、穩(wěn)定性研究等。在檢測體系開發(fā)完成后,需要根據ICH及藥典要求進行分析方法驗證的評估,以確保整個檢測體系的線性、范圍、檢測限、定量限、準確度、精密度、專屬性以及耐用性等可以滿足法規(guī)要求。

湖州申科生物致力于開發(fā)接近實際工藝的商業(yè)化宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒,通過不同工藝的HCP差異化分析,針對性輸出不同細分工藝領域的HCP檢測試劑盒。實驗數據表明:針對CHO-S與CHO-K1兩種宿主細胞,二者共享2458種共同HCP(占比79.7%),但分別存在392種與236種特異HCP,凸顯工藝差異導致的殘留蛋白特異性。進一步對比B3表達菌與K2克隆菌,二者雖共享1489種相同蛋白(占比88%和85%),但仍分別檢出208種和258種獨有蛋白,差異率達12%-15%。這些發(fā)現直接驗證不同工藝路線與克隆選擇會影響HCP殘留譜的組成。因此,湖州申科提出"工藝定制化檢測"策略——通過準確識別共性及特異HCP,針對性開發(fā)細分試劑盒產品。
宿主檢測方法替換需橋接驗證,確保新舊方法結果一致性與可比性。

MRC-5宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒,宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測

湖州申科生物建立了專業(yè)化宿主細胞蛋白殘留檢測平臺,利用 ELISA 方法分析宿主細胞蛋白總量,嚴格把控CV差異和回收率結果,保證實驗結果真實性,開發(fā)的試劑盒或抗體具有靈敏度高、特異性強等特點。在技術服務方面,平臺提供兩類關鍵支撐:一是覆蓋多種宿主(包括CHO、E.coli,酵母等)的殘留HCP檢測服務,直接輸出蛋白殘留量及樣品回收率數據;二是配套的樣品適用性驗證體系,通過基質定量下限驗證、樣品稀釋度驗證、準確性驗證及精密度驗證(含重復性與中間精密度)等多維度檢測方案,結合完整的試劑盒性能報告,確保檢測結果的準確性與可溯源性,為生物制品工藝雜質控制提供可靠保障。
總蛋白檢測差異是 HCP 免疫檢測結果不同的原因之一。BHK宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測方法對比

湖州申科HCP試劑盒定制化開發(fā)方案全流程按照ISO13485質量保證體系管理,符合審計要求。MRC-5宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒

湖州申科生物CHO-K1 HCP 殘留檢測試劑盒(一步酶聯免疫吸附法)基于固相酶聯免疫吸附分析法,適用于基于CHO-K1細胞生產的生物制品中宿主殘留蛋白的定量檢測。該分析方法通過在預包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標板中加入校準品或待測樣品、HRP標記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗進行共孵育。洗滌后,加入TMB底物進行顯色反應,使用終止液終止酶催化反應。利用酶標儀在450nm波長下測讀吸光度,其吸光度與校準品或待測樣品中的HCPs濃度成正相關,通過校準品擬合的劑量-反應曲線即可計算得出待測樣品中HCPs的濃度。本試劑盒對待測樣品無需進行特殊處理,需通過合適的稀釋比例進行適用性驗證即可直接使用。本試劑盒操作步驟少,快速,檢測專一性強,性能穩(wěn)定可靠。
MRC-5宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒