酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長（水）。中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉；熒光橙紅鈉；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對蒸汽密度（g/cm3,空氣=1）：未確定4.熔點(diǎn)（oC）：3205.沸點(diǎn)（oC,常壓）：未確定6.沸點(diǎn)（oC,8kPa）：未確定7.折射率：未確定8.閃點(diǎn)（oC）：未確定9.比旋光度（o）：未確定10.自燃點(diǎn)或引燃溫度（oC）：未確定11.蒸氣壓（kPa,25oC）：未確定12.飽和蒸氣壓（kPa,60oC）：未確定13.燃燒熱（KJ/mo...

具體實(shí)驗(yàn)流程：注：該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性，不適用于對細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測。1．實(shí)驗(yàn)***天，消化并接種細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞）于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2．等細(xì)胞密度達(dá)到70％時(shí)用Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)染方法，如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．轉(zhuǎn)染24－36h后，吸取培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細(xì)胞。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會(huì)被痕量的鈣所抑制...

其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)?..

luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：，在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口，產(chǎn)品價(jià)格昂貴。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果。所以，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本，一方面可以增強(qiáng)使用效果。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光，一般是將Fireflyluciferase基...

酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長（水）。中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉；熒光橙紅鈉；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對蒸汽密度（g/cm3,空氣=1）：未確定4.熔點(diǎn)（oC）：3205.沸點(diǎn)（oC,常壓）：未確定6.沸點(diǎn)（oC,8kPa）：未確定7.折射率：未確定8.閃點(diǎn)（oC）：未確定9.比旋光度（o）：未確定10.自燃點(diǎn)或引燃溫度（oC）：未確定11.蒸氣壓（kPa,25oC）：未確定12.飽和蒸氣壓（kPa,60oC）：未確定13.燃燒熱（KJ/mo...

普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)活ti成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。螢光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶，螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期，這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年，Promega發(fā)布了di一代螢光素酶分析產(chǎn)品，并啟動(dòng)了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃，通過持續(xù)致力于...

熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段，可以對整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）熒光素酶，就可以用高敏感度的CCD相機(jī)進(jìn)行對動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行活ti觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件，如熒光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對包括影響在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如，熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可...

是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色...

螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號分子，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評價(jià)其發(fā)光能力。通過建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)...

可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí)，在植物中的半衰期為3．5小時(shí)。由于半衰期短，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會(huì)積累。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2．...

8．取剩余裂解液測定LacZ的活性，其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù)。9.用矯正后的讀數(shù)作圖，分析數(shù)據(jù)。注：熒光素見光易氧化，已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄。注意事項(xiàng)：1．熒光素酶檢測試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng)，而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動(dòng)或手動(dòng)檢測。當(dāng)用液閃計(jì)數(shù)儀時(shí)，加入熒光素酶檢測試劑后立即輕輕混勻。2．如果細(xì)胞裂解后不能立即對提取物進(jìn)行檢測，樣品可以在冰上保存大約5h，在-70℃可保存數(shù)月。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低。3．利用上述方法檢測冷的樣品時(shí)，其信號強(qiáng)度將下降5-15%。4．在熒光素酶活性較高的情況下，導(dǎo)致信號超出線性范圍（信號溢出）可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋...

通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動(dòng)力學(xué)，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理，并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2...

SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應(yīng)用：1）體外化學(xué)發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實(shí)驗(yàn)（invivo）；3）高靈敏度ATP分析；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作...

酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長（水）。中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉；熒光橙紅鈉；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對蒸汽密度（g/cm3,空氣=1）：未確定4.熔點(diǎn)（oC）：3205.沸點(diǎn)（oC,常壓）：未確定6.沸點(diǎn)（oC,8kPa）：未確定7.折射率：未確定8.閃點(diǎn)（oC）：未確定9.比旋光度（o）：未確定10.自燃點(diǎn)或引燃溫度（oC）：未確定11.蒸氣壓（kPa,25oC）：未確定12.飽和蒸氣壓（kPa,60oC）：未確定13.燃燒熱（KJ/mo...

可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí)，在植物中的半衰期為3．5小時(shí)。由于半衰期短，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會(huì)積累。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2．...

更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物，而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）。免疫熒光法免疫熒光法的基本...

海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒提供了一種快速，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性，與海腎螢光素酶相互作用后，該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒特點(diǎn)：該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分。熒光素酶是生物體內(nèi)催化熒光素等物質(zhì)氧化發(fā)光的一類酶的總稱。自然界中，不同的發(fā)光生...

或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射。4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而...

熒光素也就是FDAFDA可透過細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低，因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細(xì)胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和530nm。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相...

常見的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase，編碼基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長不同），當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。***成像技術(shù)（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù)，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底...

2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液；3）腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析。（對每只動(dòng)物模型做熒光素動(dòng)力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時(shí)間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報(bào)告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測序和各種...

熒光素也就是FDAFDA可透過細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低，因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細(xì)胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和530nm。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常?？梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相...

D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活題成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Lu...

注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化，如有條件，可以對儲存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４妗?）對于檢測靈敏度要求特別...

后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵...

按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號檢測時(shí)間和信號平臺期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測，盡...

每孔加入100μl養(yǎng)24h后，Luciferin使其終濃度為150μg/ml，PBS，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測，分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細(xì)胞生長曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞，接種于24孔板，接種密度為2×104/孔。細(xì)胞接種后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞生長天數(shù)為橫坐標(biāo)，細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo)，分別繪制兩種細(xì)胞生長曲線。二．動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周齡，體重（15±2）g，雌雄各3只。取對數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/...

產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，構(gòu)建原位**模型，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價(jià)等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。注：在抗**藥物藥效評價(jià)試驗(yàn)中，由于生物...

4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.活ti成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號檢測時(shí)間和信號平臺期。注意事項(xiàng)1）本品（firefly...

熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段，可以對整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）熒光素酶，就可以用高敏感度的CCD相機(jī)進(jìn)行對動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行活ti觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件，如熒光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對包括影響在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如，熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可...