按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。注意事項1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號115144-35-9為準。2）注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3）如果要進行ATP的檢測，盡量避免外源ATP的污染，如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材，在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水。4）為避免反復凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化，如有條件，可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存。5）對于檢測靈敏度要求特別高的實驗，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進行D-熒光素鉀鹽的溶解時，應使用無鈣鎂離子的DPBS，因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測。7）為了您的安全和健康。南京D-熒光素鉀鹽測試公司有哪幾家。連云港D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存
Q：熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時具有更寬的動態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進行失蹤定位，并且其觀測不需裂解細胞，方便進行適時觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q：雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炥D(zhuǎn)染效率很低而且復孔重復不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善，首先要確保細胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細胞，另外陽性對照您可以選擇過表達的熒光蛋白質(zhì)粒，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結(jié)果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。蘇州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽使用說明做D-熒光素鉀鹽測試價格是多少。
室溫培育30min后加入細胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時加入實驗確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現(xiàn)。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性。檢測時，各克隆按1×105個/孔接種到24孔板，24h后細胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個克隆設(shè)3個復孔，保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過5代后進行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數(shù)將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細胞，一組只有培養(yǎng)基作對照，設(shè)置2個復孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。
是新型底物開發(fā)的一個早期實例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計出一種新型螢光素酶報告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報告基因有著范圍廣的應用前景，為進一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項針對各種能量受體熒光基團的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進行活細胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標簽和一個更大，更精細的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補結(jié)合。做D-熒光素鉀鹽測試找哪家公司？
請穿實驗服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途！D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下，D-熒光素鉀被氧化，產(chǎn)生藍綠色的光(560nm)，當?shù)孜镞^量時，產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動物細胞的常用報告基因。由于沒有背景干擾，因此可以很容易地檢測出低至。用途D-熒光素鉀鹽是一類在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物，如螢火蟲。在ATP存在下，螢光素酶將其氧化脫羧后會發(fā)光?；瘜W研究中可用于熒光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是螢火蟲熒光素酶的底物。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。流式抗體熒光染料
D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長？連云港D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存
普遍應用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)活ti成像技術(shù)。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。螢光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶，螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學和分子生物學的早期，這一現(xiàn)象被認為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年，Promega發(fā)布了di一代螢光素酶分析產(chǎn)品，并啟動了基于螢光素酶的進一步創(chuàng)新計劃，通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月，Promega初次提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報告基因技術(shù)的應用可能性。當時的人們認為，螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點，可能會對分子生物學家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個月后，di一代螢火蟲螢光素酶報告基因載體和檢測試劑在Promega誕生，使這項新技術(shù)正式并更范圍廣地為全球研究人員服務。連云港D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存