連云港D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存

    按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號(hào)檢測時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化，如有條件，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４妗?）對(duì)于檢測靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn)，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí)，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS，因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測。7）為了您的安全和健康。南京D-熒光素鉀鹽測試公司有哪幾家。連云港D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存

    Q：熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時(shí)具有更寬的動(dòng)態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時(shí)由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號(hào)很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進(jìn)行失蹤定位，并且其觀測不需裂解細(xì)胞，方便進(jìn)行適時(shí)觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對(duì)活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報(bào)告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q：雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個(gè)方面改善，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞，另外陽性對(duì)照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗(yàn)證。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)即可。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。蘇州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽使用說明做D-熒光素鉀鹽測試價(jià)格是多少。

    室溫培育30min后加入細(xì)胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細(xì)胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細(xì)胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時(shí)加入實(shí)驗(yàn)確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細(xì)胞抗性克隆的出現(xiàn)。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時(shí)用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性。檢測時(shí)，各克隆按1×105個(gè)/孔接種到24孔板，24h后細(xì)胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個(gè)克隆設(shè)3個(gè)復(fù)孔，保留RLU值高的細(xì)胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過5代后進(jìn)行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個(gè)克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細(xì)胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細(xì)胞按細(xì)胞數(shù)將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細(xì)胞，一組只有培養(yǎng)基作對(duì)照，設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。

    是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合。做D-熒光素鉀鹽測試找哪家公司？

    請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途！D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下，D-熒光素鉀被氧化，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm)，當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí)，產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因。由于沒有背景干擾，因此可以很容易地檢測出低至。用途D-熒光素鉀鹽是一類在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物，如螢火蟲。在ATP存在下，螢光素酶將其氧化脫羧后會(huì)發(fā)光?；瘜W(xué)研究中可用于熒光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是螢火蟲熒光素酶的底物。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。流式抗體熒光染料

D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長？連云港D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存

    普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)活ti成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。螢光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶，螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期，這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺(tái)。1991年，Promega發(fā)布了di一代螢光素酶分析產(chǎn)品，并啟動(dòng)了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃，通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月，Promega初次提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性。當(dāng)時(shí)的人們認(rèn)為，螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點(diǎn)，可能會(huì)對(duì)分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個(gè)月后，di一代螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測試劑在Promega誕生，使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更范圍廣地為全球研究人員服務(wù)。連云港D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存