每孔加入100μl養(yǎng)24h后，Luciferin使其終濃度為150μg/ml，PBS，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測，分析發(fā)光強度與細胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細胞生長曲線繪制MCF7-luc細胞和作為對照取表達熒光素酶的MCF-7細胞，接種于24孔板，接種密度為2×104/孔。細胞接種后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔細胞，用細胞計數(shù)儀測定細胞數(shù)。以細胞生長天數(shù)為橫坐標，細胞數(shù)目為縱坐標，分別繪制兩種細胞生長曲線。二．動物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周齡，體重（15±2）g，雌雄各3只。取對數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/ml懸液，每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl，共接種6只。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測信號強度。以后每5d觀測一連續(xù)觀測30d。觀測前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉（計量為：35mg/kg體重），按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin（invivograde），10min后，進行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況，定量分析各時間點的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學觀察MCF-7-luc細胞裸鼠皮下接種后25d，脫頸處死小鼠，取腫大的瘤組織，制成石蠟切片，切片厚度為3μm。D-熒光素鉀鹽適用于哪些領(lǐng)域？無錫游離酸D-熒光素鉀鹽公司
附錄ⅧB），與標準硫酸鉀溶液制成的對照液比較，不得更濃（）。干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過%（附錄ⅧL）。鋅鹽取本品，加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后，加稀鹽酸2ml，搖勻，濾過，濾液中加亞鐵**鉀試液1ml，不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴，點于濾紙上，即生成黃色斑點，趁濕置溴蒸氣中，1分鐘后再使與氨蒸氣接觸，斑點即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強烈的熒光，用大量的水稀釋后仍極明顯；但加酸使成酸性后，熒光即消失；再加堿使成堿性，熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應（附錄Ⅲ）。6含量測定編輯取本品約，精密稱定，加水20ml溶解后，加稀鹽酸5ml使熒光素析出，用丁醇－氯仿(1:1)提取4次，每次20ml，合并提取液，用水10ml洗滌，洗液再用異丁醇－氯仿(1:1)5ml振搖提取，合并提取液，置105℃恒重的容器中，在水浴上通風蒸發(fā)至干，殘渣用乙醇10ml溶解后，再置水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，精密稱定，殘渣重量與相乘，即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機化合物，分子式為C20H10Na2O5，橙紅色粉末，無氣味，有吸濕性；易溶于水，溶液呈黃紅色，并帶極強的黃綠色熒光。南京熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應商D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司。
luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusoleariu'）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中，發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物，而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyrali'）。應用熒光素酶可以在實驗室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實驗。
tetrametrylrhodarnineisothiocyante，TRITC）是一種紫紅色粉末，較穩(wěn)定，是羅達明（rhodamine）的衍生物。更大吸收光譜550urn，更大發(fā)射光譜620urn呈橙紅色熒光，與FITC發(fā)射的黃綠色熒光對比鮮明，常用于雙標記染色。按照抗原抗體反應的結(jié)合步聚，免疫熒光法可分為以下三種。1．直接法用熒光素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結(jié)合，以檢查出相應的抗原成分。2．間接法先用特異性抗體與相應的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的抗體，再用熒光素標記的抗特異性抗體（間接熒光抗體）與特異性抗體相結(jié)合，形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的復合物。在此復合物上帶有比直接法更多的熒光抗體，所以，此法較直接法靈敏。3．補體法用特異性的抗體和補體的混合液與標本上的抗原反應，補體就結(jié)合在抗原抗體復合物上，再用抗補體的熒光抗體與之相結(jié)合，就形成了抗原一抗體一補體一抗補體熒光抗體的復合物。熒光顯微鏡下所見到的發(fā)出熒光的部分即是抗原所在的部位。補體法具有敏感性強的優(yōu)勢，同時適用于各種不同種屬來源的特異性抗體的標記顯示，在各種不同種屬動物抗體的檢測上為更常用的技術(shù)方法熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱。南京D-熒光素鉀鹽測試公司哪家便宜。
可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點：①非放射性；②比CAT及其他報告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細胞中的半衰期為3小時，在植物中的半衰期為3．5小時。由于半衰期短，故啟動子的改變會即時導致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會積累。相反，CAT在哺乳細胞中的半衰期為50小時。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號強度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學方法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。2．設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質(zhì)粒備用。4．擴增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用。同時準備相應的空載質(zhì)粒對照，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細胞），并接種于24孔板中，生長10-24小時（80%匯合度）。6．將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測。8．加入底物，測定熒光素酶的活性。9．計算相對熒光強度，并與空載對照比較。D-熒光素鉀鹽運輸條件是4℃冰袋運輸。無錫游離酸D-熒光素鉀鹽公司
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其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應化學反應中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應的速率非常慢，而鈣離子的存在常常可以進一步加速反應（與肌肉收縮的情況相似）。[1]熒光生成反應通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中，發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物。無錫游離酸D-熒光素鉀鹽公司