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海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測(cè)。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒提供了一種快速,靈敏的方法,可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測(cè)中檢海腎螢光素酶的活性,與海腎螢光素酶相互作用后,該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒特點(diǎn):該測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測(cè)量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測(cè)所必不可少的組分。熒光素酶是生物體內(nèi)催化熒光素等物質(zhì)氧化發(fā)光的一類酶的總稱。自然界中,不同的發(fā)光生物擁有不同的熒光素酶,除了螢火蟲(chóng)熒光素酶(FireflyLuciferase)之外,還有發(fā)光細(xì)菌體內(nèi)的細(xì)菌熒光素酶、發(fā)光海星的海星熒光素酶等。目前,人們對(duì)螢火蟲(chóng)熒光素酶的研究**多、應(yīng)用***。一則關(guān)于手機(jī)上的細(xì)菌的新聞里,**在用ATP熒光檢測(cè)儀檢測(cè)手機(jī)表面的細(xì)菌。ATP是一種在動(dòng)物、植物和細(xì)菌等活細(xì)胞中都存在的能量物質(zhì),由前述的反應(yīng)式可知,ATP與熒光素、熒光素酶反應(yīng)發(fā)出熒光。檢測(cè)樣品中的微生物越多,ATP就越多,熒光反應(yīng)的光亮就越大。南京翌科生物科技有限公司的D-熒光素鉀鹽測(cè)試怎么樣?揚(yáng)州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商
luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲(chóng),而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusoleariu')或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲(chóng)中,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲(chóng),含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲(chóng)有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲(chóng)、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng))則有更多,因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)(Photinuspyrali')。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。熒光增白劑ob-1價(jià)格D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。
可用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)靈敏方便地測(cè)定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn):①非放射性;②比CAT及其他報(bào)告基因速度快;③比CAT靈敏100倍;④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí),在植物中的半衰期為3.5小時(shí)。由于半衰期短,故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變,而熒光素酶不會(huì)積累。相反,CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范圍內(nèi),熒光信號(hào)強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下,可檢測(cè)到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測(cè)步驟:1.用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2.設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段,將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒(pGL3-basic)中。3.篩選陽(yáng)性克隆,測(cè)序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用。4.?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照,提純備用。5.培養(yǎng)293(或其它目的細(xì)胞),并接種于24孔板中,生長(zhǎng)10-24小時(shí)(80%匯合度)。6.將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7.提取蛋白并用于熒光素酶檢測(cè)。8.加入底物,測(cè)定熒光素酶的活性。9.計(jì)算相對(duì)熒光強(qiáng)度,并與空載對(duì)照比較。
請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途!D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下,D-熒光素鉀被氧化,產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm),當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí),產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因。由于沒(méi)有背景干擾,因此可以很容易地檢測(cè)出低至。用途D-熒光素鉀鹽是一類在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物,如螢火蟲(chóng)。在ATP存在下,螢光素酶將其氧化脫羧后會(huì)發(fā)光?;瘜W(xué)研究中可用于熒光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是螢火蟲(chóng)熒光素酶的底物。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試工作液是先用現(xiàn)配。
GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲(chóng),游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲(chóng)熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一、活題成像技術(shù)簡(jiǎn)介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測(cè)量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移以及對(duì)藥物的反應(yīng)。在藥效學(xué)評(píng)價(jià)方面,熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動(dòng)物水平上進(jìn)行長(zhǎng)期療效跟蹤觀察。利用無(wú)創(chuàng)傷活題成像對(duì)哎細(xì)胞生長(zhǎng)的檢測(cè),可對(duì)哎癥治的好之前和過(guò)程中的哎細(xì)胞的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)和評(píng)估。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光,不需要激發(fā)光,但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶的底物熒光素,約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素。D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存是有效期一年。fam熒光基團(tuán)
D-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù)。揚(yáng)州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商
在食品衛(wèi)生領(lǐng)域由于ATP生物發(fā)光技術(shù)無(wú)需培養(yǎng)過(guò)程,操作簡(jiǎn)便、靈敏度高,數(shù)分鐘內(nèi)可得到結(jié)果,具有其它微生物檢測(cè)方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),是目前檢測(cè)微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲(chóng)和幾種其它甲蟲(chóng)中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲(chóng)熒光酶/熒光素。通過(guò)中間體dioxetanone介導(dǎo)作用,熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲(chóng)熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個(gè)反應(yīng)發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學(xué)熒光達(dá)到更高峰,當(dāng)熒光素和ATP都超量存在的條件下,發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關(guān)系。螢火蟲(chóng)熒光素酶很早以前就用于與抗體結(jié)合形成偶聯(lián)物,作為免疫分析中用熒光素作為底物進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)簽。與HRP和堿性磷酸酶相比,熒光素酶不耐化學(xué)修飾。這個(gè)酶的一個(gè)特殊的優(yōu)點(diǎn)是,除了高靈敏度外,在哺乳動(dòng)物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個(gè)重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測(cè)污染,因?yàn)楫a(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對(duì)食品表面的檢測(cè),無(wú)論是在加工制作工程中設(shè)備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物。揚(yáng)州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商