DNA轉(zhuǎn)染試劑配制

胞因素用低代數(shù)的細(xì)胞293T細(xì)胞非常重要！！當(dāng)然也要保證細(xì)胞狀態(tài)特別好，沒有細(xì)微污染，鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細(xì)胞才可以產(chǎn)生較高滴度的***哦！載體系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質(zhì)粒系統(tǒng)、四質(zhì)粒系統(tǒng)，當(dāng)然使用三質(zhì)粒系統(tǒng)的小伙伴居多，一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)！載體構(gòu)建和質(zhì)粒抽提純化我們要注意是否構(gòu)建時導(dǎo)致質(zhì)粒載體重組或某個部件缺失，或污染別的質(zhì)粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習(xí)慣：建議目的基因載體和陰性對照GFP載體是同一批，且建議每次包裝都如此操作，要保證目的基因的表達(dá)載體構(gòu)建純化良好，質(zhì)粒間比例得當(dāng)，并且對質(zhì)粒進(jìn)行酶切驗(yàn)證。3.0試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染的每個個體間所檢測的生物標(biāo)志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異。DNA轉(zhuǎn)染試劑配制

Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑 成功轉(zhuǎn)染THP-1 (人單核白血病細(xì)胞) 懸浮細(xì)胞                 ZETA LIFE                                             ZETA LIFE                                                              微信號                               gh_97714b427409

功能介紹                               美國 Zeta Life公司是國際無血清細(xì)胞培養(yǎng)基 DMEM/F12主要完成人，有三十多年的胎牛血清、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)； Zeta Life與美國加利福尼亞大學(xué)聯(lián)合開發(fā)全球細(xì)胞體內(nèi)可代謝轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為全球細(xì)胞轉(zhuǎn)染優(yōu)先技術(shù)之一。                                                                                                      7月17日                 收錄于話題Zeta Life Advanced DNA RNA，AD600150轉(zhuǎn)染試劑；

成功轉(zhuǎn)染THP-1 (人單核白血病細(xì)胞) 懸浮細(xì)胞；

來自廣州中山大學(xué)附屬**醫(yī)院客戶的喜訊;

出色的細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果與您分享;

24小時熒光圖片:

zeta life，Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息如下 慢病毒轉(zhuǎn)染試劑分裝用于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑，還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?.

用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，左圖轉(zhuǎn)染GFP cDNA，右圖共轉(zhuǎn)染GFP CDNA和GFP靶向siRNA。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。

4適用于神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染圖4.  用LipoFectMax? 和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白（GFP），轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果，LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染效率（左圖）比LipoFectamine®2000（右圖）高5倍。

LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程

細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax? ，LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作，通過計算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性。

.在多種不同類型細(xì)胞中基因敲除效率超過90%。

2.高靈活應(yīng)用， 同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實(shí)驗(yàn)。

3.細(xì)胞毒性低，結(jié)果相關(guān)性好，確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過程本身介導(dǎo)。

4.兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。

圖4. X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4種細(xì)胞系的HPRT基因沉默實(shí)驗(yàn)。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程，或標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法，將100nM HPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細(xì)胞。 通過LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的熒光定量法評估基因沉默效率。結(jié)果顯示用羅氏這款試劑在四種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。 所見即所得——分享兩款超好用的轉(zhuǎn)染試劑,拯救你的細(xì)胞.

簡介：X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉(zhuǎn)染各類真核細(xì)胞(包括昆蟲細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢：

1.簡單易用的多組分混合試劑，無動物源性成分，室溫穩(wěn)定。

2.高轉(zhuǎn)染效率，對于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。

3.使用細(xì)胞毒性低的試劑，結(jié)果相關(guān)性好。

圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENE HP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高于X-tremeGENE HP，導(dǎo)致存活細(xì)胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò))。 .0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得：只需簡單地混合，并進(jìn)行孵育（30min）、稀釋、及注射即可。上海pei轉(zhuǎn)染試劑推薦

將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合.DNA轉(zhuǎn)染試劑配制

轉(zhuǎn)染 48 小時后，使用尼康熒光顯微鏡 GFP 熒光進(jìn)行成像（左側(cè)四幅圖），A：LipoD293； B：293fectin；C：Xfect 和 D：Fugene 6.  帶有 6xHis 標(biāo)記的 GFP 熒光蛋白使用 Ni-NTA 親和柱技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離。5 微升洗脫液載入 SDS-PAGE 凝膠電泳分離并進(jìn)行 Coomassie 亮藍(lán)染色（右上圖 E），道 1 為 LipoD293293、道 2 為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子、道 3 為 Xfect、道 4 為 293fectin 和道 5 為 Fugene 6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量（見右下圖 F）。產(chǎn)生慢***的比較

通過 LipoD293? 試劑（升級版）和 Lipofectamine LTX（LTX）試劑將三個 cDNAs 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293T 細(xì)胞。一個 GFP 載體，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細(xì)胞，其次是分別添加不同量的慢定都上清液，1 微升（上圖）和 10 微升（下圖）。 DNA轉(zhuǎn)染試劑配制