用于轉染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi復合物非常容易獲得:只需簡單地混合,并進行孵育(30min)、稀釋、及注射即可。
靶向敲低
在實驗靶標中可觀察到高達85%的敲低效果
使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的復合物,以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進行注射,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達85%的敲低(使用TaqMan分析對敲低進行評估)。 轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,連續(xù)細胞系和原代細胞.國產轉染試劑公司
圖7.對注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進行血液化學分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內。在注射后2、24及48小時收集血液樣品,并通過臨床化學檢測方法對數(shù)個生物標志物(Antech)進行評估。結果表明在使用Invivofectamine3.0試劑進行轉染的每個個體間所檢測的生物標志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異。除了以上兩種于siRNA的轉染試劑,還有通用型轉染試劑Lipofectamine?2000,Lipofectamine?3000和Neon?轉染系統(tǒng)也可以用于siRNA轉染腺病毒轉染試劑質粒細胞轉染步驟是什么?
簡介:X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優(yōu)勢:1.簡單易用的多組分混合試劑,無動物源性成分,室溫穩(wěn)定。2.高轉染效率,對于原代細胞和使用其它試劑難轉染的**細胞系有高轉染效率。3.使用細胞毒性低的試劑,結果相關性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉染性能。通過X-tremeGENEHP和脂質體轉染方法將GFP表達質粒轉染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質體轉染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENEHP,導致存活細胞量減少(圖片來源于網絡)...
胞因素用低代數(shù)的細胞293T細胞非常重要!!當然也要保證細胞狀態(tài)特別好,沒有細微污染,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細胞才可以產生較高滴度的***哦!載體系統(tǒng)在實驗中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質粒系統(tǒng)、四質粒系統(tǒng),當然使用三質粒系統(tǒng)的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!載體構建和質粒抽提純化我們要注意是否構建時導致質粒載體重組或某個部件缺失,或污染別的質粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習慣:建議目的基因載體和陰性對照GFP載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達載體構建純化良好,質粒間比例得當,并且對質粒進行酶切驗證。帶你了解性價比比較高的轉染試劑-PEI轉染.
超級好用的siRNA和miRNA轉染試劑——HiPerFect高效沉默低脫靶:HiPerFect是小RNA轉染試劑,這種非脂質體的脂質分子可以在siRNA低至100pM濃度的條件下轉染(推薦濃度是1nM-5nM)。保持高效基因沉默的同時降低脫靶效應,正是這一產品的精髓所在。除了siRNA,HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和***劑的轉染,滿足miRNA功能分析的需要。操作簡單,方便快速:HiperFect轉染試劑的方便程度也是***的,甚至***之內可以完成再次接種、轉染到檢測結果!這對于高通量反應簡直是求之不得的福音:轉染前將細胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)基可以是含有***和血清的,在37度培養(yǎng)箱中保溫。用了這個轉染試劑,慢***再也不用怕轉不進去了!體內轉染試劑配方
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對 HepG2 細胞轉染效率的比較
右圖:使用以上轉染試劑將 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生產商的提供的轉染步驟轉染到 HepG2 細胞(在膠原預處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng))。在轉染 48 小時之后,用流式細胞儀檢測 GFP 陽性細胞(%)和熒光強度。
左圖:血清和***存在的條件下能提高 LipoD293 試劑(升級版)對在 HepG2 細胞的轉染效率。通過三種不同的條件下轉染 HepG2 細胞(生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無血清和***,10% 血清和***的存在,轉染 5 小時后換液和不換液。
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