江蘇宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

來源： 發(fā)布時間：2025-08-28

宿主細(xì)胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準(zhǔn)確性，需要在檢測之前進(jìn)行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進(jìn)行方法學(xué)確認(rèn)。HCP是一種多蛋白質(zhì)的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結(jié)果會存在一定程度的差異，這也是導(dǎo)致HCP免疫檢測方法結(jié)果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結(jié)果差異較大，一般同時采用2種以上經(jīng)過確認(rèn)的方法檢測，再取均值?？偟鞍讬z測方法的定量限一般只能達(dá)到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產(chǎn)品校準(zhǔn)品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產(chǎn)品校準(zhǔn)品中存在稀釋誤差，需要對產(chǎn)品校準(zhǔn)品進(jìn)行重新標(biāo)定賦值。
HCP抗體能識別工藝中存在的HCP，避免有占優(yōu)勢的抗體聚集，尤其關(guān)注潛在的高風(fēng)險性HCP的識別能力。江蘇宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

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針對宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測，工藝特異型檢測試劑盒（upstream-process）專為特定生產(chǎn)工藝設(shè)計，其關(guān)鍵在于使用產(chǎn)物的實際宿主細(xì)胞進(jìn)行開發(fā)與驗證，模擬真實生產(chǎn)流程獲取廣譜HCP抗原，并要求抗血清具備高度覆蓋率以適應(yīng)工藝變動，確保對特定生產(chǎn)流程殘留的高度準(zhǔn)確監(jiān)控。平臺型檢測試劑盒（platform）則由生產(chǎn)商針對其特定表達(dá)宿主細(xì)胞和相近工藝自行開發(fā)，其優(yōu)勢在于可使用相同的參考標(biāo)準(zhǔn)品和試劑統(tǒng)一監(jiān)測在該宿主上生產(chǎn)的不同產(chǎn)品，適用于上游工藝足夠相似的產(chǎn)品線。通用型檢測試劑盒（commercial）則作為市售廣譜方案，適用于相似宿主細(xì)胞的常規(guī)檢測，但因其制備過程可能無法完全模擬目標(biāo)產(chǎn)物的實際生產(chǎn)，必須嚴(yán)格評估多克隆抗體對特定產(chǎn)品HCP的覆蓋率，以保證檢測可靠性。三類試劑盒覆蓋從深度定制到通用篩查的不同需求。
廣東工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析湖州申科HCP試劑盒開發(fā)經(jīng)抗原表征、抗體制備到體系驗證，全流程符合法規(guī)要求。

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在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法中， ELISA方法是廣泛應(yīng)用的，并作為QC日常放行檢測的主要手段。ELISA方法相對簡單、精度良好，方便設(shè)定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)和過程控制；但ELISA方法檢測依靠抗原抗體特異性結(jié)合，因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關(guān)重要。無論是商品化ELISA試劑盒，還是自制的多克隆抗體，如果抗體的特異性和適用性不夠高，都有可能帶來HCPs漏檢的風(fēng)險，從而對生物制品質(zhì)量安全帶來風(fēng)險。除此之外，ELISA檢測HCPs使用多克隆抗體，無法針對性的提供高風(fēng)險HCPs殘留蛋白真實存在情況。

為什么定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測的優(yōu)先選擇？原因之一是建立定制化檢測體系，更滿足商業(yè)化生產(chǎn)HCP工藝雜質(zhì)控制要求。在HCP校準(zhǔn)品和HCP抗體兩大關(guān)鍵試劑組分滿足要求的前提下，定制化方法的建立和優(yōu)化是基于真實純化中間品和原液樣品進(jìn)行，通過優(yōu)化檢測條件，提高對低濃度HCPs的檢測靈敏度，滿足工藝驗證和過程控制要求。在臨床三期，生產(chǎn)工藝需要進(jìn)行系統(tǒng)驗證，以確保其穩(wěn)定性和可重復(fù)性。定制化HCP ELISA檢測方法能夠更準(zhǔn)確地監(jiān)測生產(chǎn)工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供有力支持。在過程控制中，通過工藝特異型的HCP ELISA檢測方法，可以實時監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，具備更強的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，及時發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)風(fēng)險，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
抗體覆蓋率評估分析需要考慮不同方法間存在的差異，以及如何持續(xù)改進(jìn)和評估方法實驗過程的質(zhì)量控制。

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湖州申科生物結(jié)合不同宿主實際的生產(chǎn)工藝，通過高質(zhì)量免疫原和 HCP 多抗的標(biāo)準(zhǔn)化制備流程，獲得高效價、高覆蓋率的抗體，開發(fā)了適用于大腸桿菌表達(dá)菌 (BL21) 生產(chǎn)工藝、克隆菌堿裂法提取質(zhì)粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒， 適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產(chǎn)品等的HCP定量監(jiān)測。為確保 ELISA 對HCP定量檢測的準(zhǔn)確性，須對 HCP 抗體覆蓋率進(jìn)行驗證。湖州申科抗體覆蓋率平臺采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物（洗滌劑、鹽、脂質(zhì)、酚類和核酸等離子污染物），并設(shè)置2D 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)控，同時以陰性抗體為對照平行試驗，以提高結(jié)果準(zhǔn)確度。
基于HCP的復(fù)雜性，檢測中常遇到中間品，尤其是原液樣品無法達(dá)到稀釋線性，可能與樣品基質(zhì)的干擾有關(guān)。廣東ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

篩選HCP試劑盒需考慮線性稀釋（一步法尤重）抗基質(zhì)干擾穩(wěn)定檢測值、批間一致性、工藝匹配性等因素。江蘇宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，憑借其超高的分辨率與準(zhǔn)確度在生物分析領(lǐng)域占據(jù)重要地位。該技術(shù)不僅能實現(xiàn)對低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測，還可通過建立專屬蛋白質(zhì)譜庫準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關(guān)鍵支撐。不過，其應(yīng)用過程中面臨的關(guān)鍵挑戰(zhàn)在于，如何優(yōu)化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規(guī)范中對產(chǎn)品放行檢測的嚴(yán)格要求。在質(zhì)譜檢測環(huán)節(jié)，通過引入表征清晰的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，能夠準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風(fēng)險的高風(fēng)險蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開發(fā)產(chǎn)品專屬的 HCP ELISA 檢測方法提供有力數(shù)據(jù)支持，還能助力工藝優(yōu)化升級，加速推動生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)程。
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