成都宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

來源： 發(fā)布時間：2025-08-24

影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一是樣品質(zhì)量。HCP檢測貫穿生物制品生產(chǎn)的全過程，涉及收獲、純化、制備等多個步驟。在不同樣品基質(zhì)下，HCP檢測可能存在巨大差異。例如，對于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對HCP項目進(jìn)行檢測，因此一般在吸附工藝之前的原液階段進(jìn)行檢測。此外樣品的收集、處理和保存方式對檢測結(jié)果至關(guān)重要。不正確的處理可能導(dǎo)致蛋白降解或變性，從而影響檢測結(jié)果。例如，若采用歷史批樣品作為內(nèi)部質(zhì)控品，應(yīng)結(jié)合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)合理制定保存條件及保存期限，以保證檢測方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
抗體覆蓋率是 HCP 檢測關(guān)鍵指標(biāo)，影響結(jié)果可信度，需通過方法驗證。成都宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

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宿主細(xì)胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準(zhǔn)確性，需要在檢測之前進(jìn)行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進(jìn)行方法學(xué)確認(rèn)。HCP是一種多蛋白質(zhì)的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結(jié)果會存在一定程度的差異，這也是導(dǎo)致HCP免疫檢測方法結(jié)果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結(jié)果差異較大，一般同時采用2種以上經(jīng)過確認(rèn)的方法檢測，再取均值?？偟鞍讬z測方法的定量限一般只能達(dá)到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產(chǎn)品校準(zhǔn)品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產(chǎn)品校準(zhǔn)品中存在稀釋誤差，需要對產(chǎn)品校準(zhǔn)品進(jìn)行重新標(biāo)定賦值。
工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證抗體覆蓋率評估屬于定性分析，要求是穩(wěn)定性好，靈敏度高，與ELISA檢測的原理相似，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

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大腸埃希氏菌(Escherichia coli，E. coli )又稱大腸桿菌，其作為模式微生物被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究中。大腸桿菌是表達(dá)藥用異源蛋白的常用微生物，在被批準(zhǔn)的藥用蛋白中，大約30%的產(chǎn)品以大腸桿菌作為表達(dá)宿主菌。與其他表達(dá)平臺一樣，盡管下游復(fù)雜的純化步驟已經(jīng)去除了大量的雜質(zhì)，但終產(chǎn)品中仍會存在HCP殘留風(fēng)險，必須對其進(jìn)行質(zhì)量控制，使其符合放行標(biāo)準(zhǔn)。湖州申科生物E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測試劑盒用于大腸桿菌表達(dá)菌株BL21來源的宿主細(xì)胞蛋白定量檢測，適用于重組蛋白類產(chǎn)品的工藝中間品和原液類樣品，如白細(xì)胞介素（IL）、干擾素（rhIFN）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、腫瘤壞死因子（rhTNF）、促生長因子（EGF/FGF/PDGF）等。試劑盒檢測步驟少，快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。

大腸桿菌具有遺傳性狀清晰，易于培養(yǎng)和控制，表達(dá)水平高，成本低，周期短等特點，是優(yōu)先的經(jīng)濟(jì)實惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，K-12系列和B系列菌株是工業(yè)規(guī)模上常用于生物工程的E.coli細(xì)菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大量生產(chǎn)質(zhì)粒DNA并進(jìn)一步制備細(xì)胞基因治療產(chǎn)品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株，如BL21，更適用于高效轉(zhuǎn)染表達(dá)載體和常規(guī)蛋白的表達(dá)，如：病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細(xì)胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物針對這兩種菌株的特點，分別開發(fā)了E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
湖州申科建立宿主特異 HCP 數(shù)據(jù)庫，支持高風(fēng)險蛋白準(zhǔn)確鑒定與分析。

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HEK 293細(xì)胞來源于人胚腎細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞與基因治療領(lǐng)域，如病毒載體的生產(chǎn)等。盡管生物制品會經(jīng)過一系列純化工藝以去除相關(guān)雜質(zhì)，但殘留的微量宿主細(xì)胞蛋白（HCP）仍會引發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答，影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。因此，需要對生產(chǎn)工藝中殘留的HEK 293 HCP進(jìn)行定量檢測，使其符合放行標(biāo)準(zhǔn)。湖州申科生物HEK 293 HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）適用于HEK 293和HEK 293T來源的生物制品（重組蛋白類、細(xì)胞和基因治療類等）中宿主細(xì)胞蛋白的定量檢測。試劑盒檢測步驟少，快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。
抗體覆蓋率評估分析需要考慮不同方法間存在的差異，以及如何持續(xù)改進(jìn)和評估方法實驗過程的質(zhì)量控制。北京PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

湖州申科系列HCP檢測產(chǎn)品均進(jìn)行了校準(zhǔn)品的表征分析，抗體覆蓋率分析。成都宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

各國法規(guī)要求必須對生物藥品進(jìn)行分析和純化，以將宿主細(xì)胞蛋白HCP降低到可接受的水平；即使終產(chǎn)品中痕量的宿主細(xì)胞蛋白HCP到達(dá)患者體內(nèi)，尚不清楚特定的殘留蛋白質(zhì)雜質(zhì)是否會影響藥物的穩(wěn)定性或免疫原性。關(guān)于HCP的限量標(biāo)準(zhǔn)，美國藥典推薦值為終產(chǎn)品的HCP水平1-100 ng/mg；中國藥典各論中E.coli菌體HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.10% (1000 ng/mg)，CHO細(xì)胞HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.05% (500 ng/mg)，假單胞菌HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.02% (200 ng/mg)。
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