酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是現(xiàn)***物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中不可或缺的基石技術(shù)之一。其**原理是利用抗原-抗體特異性結(jié)合的高親和力與酶催化的高效信號(hào)放大作用相結(jié)合。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),就是將待測(cè)物(抗原或抗體)特異性吸附(固定)在固相載體(通常是96孔聚苯乙烯微孔板)表面,然后加入酶標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行特異性識(shí)別結(jié)合。洗去未結(jié)合的物質(zhì)后,加入該酶的相應(yīng)底物。酶催化底物發(fā)生顯色、發(fā)光或熒光反應(yīng),產(chǎn)生的信號(hào)強(qiáng)度與待測(cè)樣品中目標(biāo)分子的含量在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)(或負(fù)相關(guān),取決于檢測(cè)模式)。通過(guò)測(cè)量吸光度、發(fā)光值或熒光強(qiáng)度,并與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,即可對(duì)待測(cè)樣品中的目標(biāo)物進(jìn)行定量或定性分析。這種巧妙的設(shè)計(jì)賦予了ELISA極高的靈敏度和特異性,使其能夠檢測(cè)極低濃度(皮克甚至飛克級(jí)別)的生物分子。實(shí)驗(yàn)時(shí)需穿戴防護(hù)裝備避免接觸終止液等腐蝕性試劑。廣東雞ELISA試劑盒怎么樣
***是內(nèi)分泌腺或細(xì)胞分泌的、通過(guò)血液循環(huán)作用于靶***的化學(xué)信使。準(zhǔn)確測(cè)定***水平對(duì)于內(nèi)分泌疾病的診斷、***監(jiān)測(cè)和生理研究至關(guān)重要。ELISA是臨床和科研中檢測(cè)多種***的主流技術(shù)?!z測(cè)對(duì)象:血清、血漿、尿液(如24h尿皮質(zhì)醇)中的肽類/蛋白類***和部分小分子類固醇***(需競(jìng)爭(zhēng)法)。o肽類/蛋白類***:胰島素、C肽、胰***素、生長(zhǎng)***(GH)、促腎上腺皮質(zhì)***(ACTH)、促甲狀腺***(TSH)、黃體生成素(LH)、卵泡刺***(FSH)、泌乳素(PRL)、甲狀旁腺***(PTH)、降鈣素等。通常使用夾心法。o類固醇***:皮質(zhì)醇、睪酮、雌二醇(E2)、孕酮(P)、脫氫表雄酮(DHEA-S)、25-羥基維生素D等。由于是小分子,主要采用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。也可檢測(cè)尿液中的***代謝物(如雌三醇)。湖北牛ELISA試劑盒銷售價(jià)格ELISA試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附原理的高靈敏度檢測(cè)工具。
食品安全關(guān)乎公眾健康。ELISA憑借其快速、靈敏、高通量、相對(duì)低成本的優(yōu)勢(shì),成為食品中危害因子(病原微生物、***、農(nóng)獸藥殘留、非法添加物、過(guò)敏原)檢測(cè)的重要工具。·檢測(cè)靶標(biāo)與模式:o食源***原菌及其***:沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、李斯特菌、金黃色葡萄球菌腸***等。常用夾心法檢測(cè)菌體抗原或***蛋白。o******(Mycotoxins):黃曲霉***B1(AFB1)、赭曲霉***A(OTA)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON嘔吐***)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、伏馬菌素(FUM)等。多為小分子,采用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。o農(nóng)藥殘留(PesticideResidues):有機(jī)磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類等殺蟲劑;三嗪類、磺酰脲類除草劑等。競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)。o獸藥殘留(VeterinaryDrugResidues):***(如β-內(nèi)酰胺類、磺胺類、四環(huán)素類、氯霉素)、合成***(如己烯雌酚DES)、β-受體激動(dòng)劑(如克倫特羅,“瘦肉精”)等。競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)。o過(guò)敏原(Allergens):檢測(cè)食品中殘留的花生、牛奶、雞蛋、麩質(zhì)、堅(jiān)果、芝麻、甲殼類等過(guò)敏原蛋白,用于生產(chǎn)交叉污染監(jiān)控和成品檢測(cè)。夾心法。o非法添加物:如三聚氰胺(奶制品)、蘇丹紅(辣椒制品)等。競(jìng)爭(zhēng)法或夾心法(針對(duì)蛋白摻假)。
ELISA技術(shù)歷經(jīng)數(shù)十年發(fā)展仍被廣泛應(yīng)用,歸功于其***的優(yōu)點(diǎn):1.高靈敏度:通過(guò)酶促反應(yīng)放大信號(hào),可檢測(cè)皮克(pg/mL)甚至飛克(fg/mL)級(jí)別的目標(biāo)分子,遠(yuǎn)高于許多傳統(tǒng)生化方法。2.高特異性:基于抗原-抗體高度特異的結(jié)合反應(yīng),尤其是使用單克隆抗體的夾心法,能有效區(qū)分結(jié)構(gòu)相似的分子。3.高通量:96孔板(或更多孔)的設(shè)計(jì)允許同時(shí)處理大量樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,結(jié)合自動(dòng)化設(shè)備(移液工作站、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀),非常適合大規(guī)模篩查和批量檢測(cè)。4.相對(duì)簡(jiǎn)便快速:試劑盒化使得操作流程標(biāo)準(zhǔn)化,無(wú)需復(fù)雜設(shè)備(基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室配備移液器、孵育箱、洗板設(shè)備、酶標(biāo)儀即可),實(shí)驗(yàn)時(shí)間通常在幾小時(shí)內(nèi)完成。5.可定量:通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的精確定量分析。6.應(yīng)用范圍極其***:可檢測(cè)幾乎所有類型的生物分子(蛋白質(zhì)、多肽、***、抗體、病原體抗原、小分子半抗原等),樣本來(lái)源多樣(血清、血漿、細(xì)胞上清、組織裂解液、尿液等)。7.成本效益相對(duì)較高:與質(zhì)譜、測(cè)序等更高級(jí)技術(shù)相比,儀器和試劑成本較低,單個(gè)樣本檢測(cè)成本可控。8.結(jié)果可視化/客觀化:顯色反應(yīng)肉眼可見(定性),吸光度讀數(shù)提供客觀數(shù)據(jù)。試劑盒的靈敏度可達(dá)pg/mL級(jí)別,滿足微量檢測(cè)需求。
競(jìng)爭(zhēng)法(CompetitiveELISA)通常用于檢測(cè)小分子抗原(半抗原),如***、藥物、***等,這些小分子通常只有一個(gè)抗原表位,無(wú)法使用夾心法。其原理基于待測(cè)抗原(樣品中)與標(biāo)記抗原(通常酶標(biāo))競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限的抗體結(jié)合位點(diǎn)。有兩種常見形式:·形式A(包被抗原):1.包被已知抗原(非目標(biāo)小分子,常為與目標(biāo)分子結(jié)構(gòu)相似的蛋白偶聯(lián)物)。2.封閉。3.同時(shí)加入:待測(cè)樣品(含未知量目標(biāo)小分子)+固定量的酶標(biāo)記特異性抗體。樣品中的游離小分子與包被抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)抗體。4.洗滌:洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體(包括與游離小分子結(jié)合的)。5.加底物顯色。試劑盒運(yùn)輸過(guò)程中需避免高溫和劇烈震蕩。湖北牛ELISA試劑盒銷售價(jià)格
部分ELISA試劑盒可檢測(cè)磷酸化蛋白修飾水平。廣東雞ELISA試劑盒怎么樣
絕大多數(shù)ELISA試劑盒(尤其是夾心法)依賴于一對(duì)特異性識(shí)別目標(biāo)抗原不同表位的單克隆抗體(mAb),或者一個(gè)單抗與一個(gè)多抗的組合。其中一個(gè)抗體作為捕獲抗體(Capture Antibody),預(yù)包被在微孔板孔底,負(fù)責(zé)從樣品中“抓住”目標(biāo)抗原。另一個(gè)抗體作為檢測(cè)抗體(Detection Antibody),通常連接有報(bào)告酶(如HRP或ALP),負(fù)責(zé)特異性識(shí)別并結(jié)合已被捕獲的抗原,形成“捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)檢測(cè)抗體”的復(fù)合物。這對(duì)抗體的質(zhì)量(親和力、特異性)及其配對(duì)的兼容性(不競(jìng)爭(zhēng)同一表位、結(jié)合效率高)是決定試劑盒靈敏度、特異性和檢測(cè)范圍的關(guān)鍵因素。***的試劑盒會(huì)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的抗體篩選和配對(duì)優(yōu)化,以確保比較好性能。有些試劑盒可能采用生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)進(jìn)行信號(hào)放大,此時(shí)檢測(cè)抗體標(biāo)記的是生物素。廣東雞ELISA試劑盒怎么樣
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