中國澳門鄭州轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報(bào)告基因，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細(xì)胞接種不同時(shí)間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示，無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，12h的熒光強(qiáng)度也比較高。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時(shí)間可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時(shí)，該研究未明確轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞死亡的影響，但可以進(jìn)一步研究不同轉(zhuǎn)染條件下細(xì)胞的存活率，以確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)降低細(xì)胞死亡的比較好條件。提高 RNA 轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率同時(shí)降低細(xì)胞死亡。中國澳門鄭州轉(zhuǎn)染試劑

考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場景不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場景可能需要不同類型的轉(zhuǎn)染試劑。***應(yīng)用：如果轉(zhuǎn)染試劑用于基因***或藥物研發(fā)等應(yīng)用，那么需要選擇具有良好生物相容性和安全性的試劑。在安全有效的遞送mRNA使用改性PEI基脂質(zhì)聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作為新型轉(zhuǎn)染試劑，這些試劑具有優(yōu)異的生物相容性、高效的遞送能力和強(qiáng)大的溶酶體逃逸能力，可直接增加mRNA穩(wěn)定性并促進(jìn)高效基因翻譯，適用于基因***等應(yīng)用4?；A(chǔ)研究：對(duì)于基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，可能更注重轉(zhuǎn)染效率和實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。在不同轉(zhuǎn)染方式用于modRNA轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞的初步研究中，比較了不同轉(zhuǎn)染方式的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)情況，以及在體內(nèi)促進(jìn)血管再生的效果，為基礎(chǔ)研究提供了參考10。綜上所述，選擇**適合的RNA轉(zhuǎn)染試劑需要綜合考慮轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子轉(zhuǎn)染能力以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場景等多個(gè)因素。在選擇轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，可以參考已有的研究文獻(xiàn)，進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以評(píng)估不同試劑的性能，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和條件選擇**合適的轉(zhuǎn)染試劑。寧夏體外轉(zhuǎn)染試劑肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。

    RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的效果存在***差異。以下將詳細(xì)闡述不同細(xì)胞類型對(duì)RNA轉(zhuǎn)染試劑效果的具體影響。腎*細(xì)胞系786-O和ACHN：微小RNA-1180（miR-1180）轉(zhuǎn)染對(duì)腎*細(xì)胞系786-O和ACHN生長有影響。實(shí)時(shí)定量（qRT）-PCR檢測顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，786-O和ACHN細(xì)胞中p21mRNA水平分別上調(diào)。Westernblot檢測表明p21蛋白表達(dá)趨勢與qRT-PCR結(jié)果相符，同時(shí)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）4、CDK6和CyclinD1蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)。流式細(xì)胞術(shù)（FCM）結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，位于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯增大，而位于S期和G2/M期的細(xì)胞比例明顯下降，表明細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期。MTS結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，兩種腎*細(xì)胞活力明顯降低。集落形成實(shí)驗(yàn)顯示miR-1180組的集落數(shù)數(shù)量明顯較少，表明細(xì)胞增殖能力降低1。HeLa細(xì)胞：兩種常見的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFECT1和INTERFERin，在使用非靶向siRNAs的模擬轉(zhuǎn)染中，會(huì)引起HeLa細(xì)胞脂質(zhì)組的改變。一些脂質(zhì)對(duì)兩種可能化學(xué)性質(zhì)不同的轉(zhuǎn)染試劑都有反應(yīng)，而其他脂質(zhì)種類只對(duì)其中一種試劑有反應(yīng)。雖然這些脂質(zhì)組改變的功能影響尚待研究，但實(shí)驗(yàn)表明在RNAi實(shí)驗(yàn)中使用適當(dāng)?shù)哪M轉(zhuǎn)染對(duì)照非常重要，比較好輔以正交擾動(dòng)。

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑GenMute試劑在人肝*細(xì)胞模型中的應(yīng)用：在人肝*細(xì)胞HepG2和Huh7.5中，研究對(duì)比了脂質(zhì)體類的Lipofectamine?RNAiMAX和HepG2特異性的聚合物類GenMute?兩種轉(zhuǎn)染試劑30。通過細(xì)胞成像分析發(fā)現(xiàn)，GenMute處理的細(xì)胞對(duì)熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照siRNA的攝取高于LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。并且，MTT實(shí)驗(yàn)表明，GenMute轉(zhuǎn)染的細(xì)胞比LipofectamineRNAiMAX處理的細(xì)胞具有更高的存活率。這提示在人肝*細(xì)胞模型中，GenMute試劑可能是更適合的轉(zhuǎn)染試劑，在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)降低了細(xì)胞死亡。siRNA共軛殼聚糖納米顆粒在脊髓損傷模型中的應(yīng)用：在創(chuàng)傷性脊髓損傷（SCI）模型中，通過制備帶有抗體靶向部分的siRNA共軛殼聚糖復(fù)合物，以抑制誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的表達(dá)，該復(fù)合物主要靶向M1巨噬細(xì)胞31。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Ab-siRNA共軛殼聚糖納米顆粒在體外***降低了M1極化巨噬細(xì)胞中的iNOS表達(dá)，具有高轉(zhuǎn)染效率和低細(xì)胞毒性。在體內(nèi)應(yīng)用該納米顆粒后，SCI后的iNOS表達(dá)和細(xì)胞凋亡均減少。這說明在特定的病理模型中，針對(duì)性設(shè)計(jì)的納米顆粒轉(zhuǎn)染試劑可以在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)降低細(xì)胞死亡。在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。

轉(zhuǎn)染試劑用量：轉(zhuǎn)染試劑的用量是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素之一。過多或過少的轉(zhuǎn)染試劑都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000對(duì)PC12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)lipo2000用量為5μL，DNA2μg，轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h時(shí)，PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高達(dá)40%，且未影響細(xì)胞的正常分泌3。在脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞效率的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，研究了細(xì)胞接種密度、DNA用量、脂質(zhì)體與DNA的比例等因素對(duì)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率的影響。結(jié)果表明，2-5次細(xì)胞傳代，2×105接種密度、4μgDNA用量、2.5:1的脂質(zhì)體與DNA比例、30min脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物形成時(shí)間以及6h細(xì)胞與復(fù)合物孵育時(shí)間，轉(zhuǎn)染效率比較高9影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。山東非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)。中國澳門鄭州轉(zhuǎn)染試劑

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對(duì)于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時(shí)用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時(shí)遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個(gè)**運(yùn)營實(shí)體的峰值輸出在動(dòng)力學(xué)上不同，連續(xù)交付的效率比較高。中國澳門鄭州轉(zhuǎn)染試劑