廣東fugene轉染試劑

為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。雖然有幾項研究已經調查了血液成分如何使脂質和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統給藥進入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩(wěn)定，還會改變生物分布或促進體內***。了解在體內遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過程中，在***和組織的細胞外基質中，以及**終進入靶細胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統?；瘜W轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。廣東fugene轉染試劑

小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質粒來實現，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結合以抑制熒光素酶的表達。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質粒DNA的共轉染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調控能力而聞名，更具體地說，是轉錄后對特定基因表達的調控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統相關的特定基因的質粒DNA可以同時共轉染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導致熒光素酶活性***降低。共轉染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對靶宿主細胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細胞類型中特定下游基因的表達，那么預計將其抑制劑序列同時轉染到同一細胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉錄后調節(jié)作用。與單一核酸類型的轉染相比，涉及將多個核酸轉移到同一細胞中的共轉染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因為并非所有核酸類型都能有效轉移，這可能取決于轉染方法和所涉及的細胞類型。西藏杭州轉染試劑南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術，開發(fā)出了Gemate系列轉染試劑。

此外，病毒濃度被認為是影響轉導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉導培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉導效率直接相關。轉染介質的條件也可能影響轉導效率。例如，在轉導過程中，使用胎牛血清比牛血清產生更好的轉導效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力，并促進病毒轉導。影響化學轉染效率的因素

共轉染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質粒DNA ,siRNA和質粒DNA ，以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常，多質粒DNA共轉染的目的是將一種以上的外源基因導入宿主細胞。其應用之一是生產由幾種質粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中，用轉移、包膜和包裝載體等幾種質粒載體生成慢病毒。此外，多個質粒DNA的共轉染也可以應用于蛋白質-蛋白質相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質與另一種蛋白質之間的關系。基因是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。

在一項將質粒DNA轉染到HUVEC中的研究中，使用包括Effectene和FuGENE 6在內的非脂質體試劑比脂質體試劑DOTAP(18%)產生了更好的轉染效率(34%和33%)。在另一項用質粒DNA轉染HUVEC的研究中，與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質體試劑(48小時時均<20%)相比，脂質體試劑顯示出更高的轉染效率(Lipofectamine LTX在48小時時約為38%，Lipofectamine 2000在48小時時約為23%)。在這些研究中，基于脂質體和非脂質體的試劑轉染HUVECs的效率無法得出結論，主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而，一致的觀察結果表明轉染效率仍然存在無論使用何種試劑，低于40%無疑暗示原代細胞是一種難以轉染的細胞類型。常用的物理/機械轉染方法包括電穿孔、聲孔、基因顯微注射和激光照射。廣東fugene轉染試劑

脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs)。廣東fugene轉染試劑

肌內注射脂質體不能引起強烈的毒性反應，這與肺內或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內研究表明，pDNA載體的肺內遞送是促炎th1樣細胞因子的產生和隨后浸潤細胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下，陽離子脂質本身不會引起免疫反應，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內***。在一項囊性纖維化臨床試驗中，急性輕度流感樣癥狀被認為是由DNA依賴效應引起的，而對照組(*脂質組)沒有觀察到這種效應。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠離網狀內皮系統的細胞，以及抑制內粒體酸化。研究表明，系統地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導致體外小鼠脾細胞和靜脈注射或鼻內滴注小鼠肺中細胞因子分泌減少。該方案還增加了轉基因表達水平。利用肌內注射等途徑，遠離網狀上皮系統進行被動靶向，也能提高轉基因表達水平。廣東fugene轉染試劑