無(wú)錫體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無(wú)毒性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸；短期保存：4℃干燥避光長(zhǎng)期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1）用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。2）用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。 D-熒光素鉀鹽測(cè)試方法是體外生物發(fā)光檢測(cè)。無(wú)錫體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    螢火蟲(chóng)熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號(hào)分子，可以用來(lái)標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評(píng)價(jià)其發(fā)光能力。通過(guò)建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測(cè)裸鼠移植瘤對(duì)藥物作用的變化情從而為分析藥物對(duì)腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)胞接種24h后，加入6孔板中，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，死亡更低的G418濃度，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF－7細(xì)胞，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉(zhuǎn)染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在250μl無(wú)血清、無(wú)雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無(wú)血清、無(wú)雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000，室溫培育5min。將上述2種稀釋液混勻。連云港游離酸D-熒光素鉀鹽濃度D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

    熒光素鈉[1]，橙紅色粉末，無(wú)氣味，有吸濕性；易溶于水，溶液呈黃紅色，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光，酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長(zhǎng)(水)。基本信息藥品名稱(chēng)熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來(lái)源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽。按干燥品計(jì)算，含C20H10Na2O5不得少于。類(lèi)別診斷用藥。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱(chēng)：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱(chēng)：FluoresceindisodiumsaltCAS號(hào)：518-47-8[2]熒光素鈉分子式：C20H10Na2O5分子量：等級(jí)：BSMDL號(hào)：MFCD00167039Beilstein號(hào)：3833041EC號(hào)：208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末；無(wú)臭，幾乎無(wú)味；有引濕性。本品在水中易溶，在乙醇中略溶。橙紅色粉末，無(wú)氣味，有吸濕性；易溶于水，溶液呈黃紅色，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光，酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長(zhǎng)(水)。4檢查資料編輯氯化物取本品，分取溶液10ml，依法檢查（附錄ⅧA），與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對(duì)照液比較，不得更濃（）。硫酸鹽取上述氯化物項(xiàng)下剩余的溶液25ml，依法檢查。

    熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng)，其中**有7a70d2e3-5dda-4f49-84be-c6的是來(lái)自螢火蟲(chóng)體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類(lèi)螢光素酶，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase，同時(shí)近年來(lái)研究得較多的來(lái)源于高斯氏菌的高斯熒光素酶（Gaussluciferase）。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過(guò)熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。螢火蟲(chóng)螢光素酶**通用和**常見(jiàn)的報(bào)告基因是北美螢火蟲(chóng)photinuspyralis的熒光素酶，該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度（體內(nèi)）甚至沒(méi)有毒性，可用于原核和真核細(xì)胞。Amplite?螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（12518）使用無(wú)DTT**配方來(lái)定量活細(xì)胞和細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性。該測(cè)定基于螢火蟲(chóng)熒光素酶，螢火蟲(chóng)熒光素酶是一種單體的61kD酶，可催化熒光素的兩步氧化，在560nm處產(chǎn)生光。Amplite?螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)：具有優(yōu)化的“混合讀取”測(cè)定規(guī)程，可與HTS液體處理儀器兼容具有高靈敏度。D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。

    包括熒光素酶和ATP水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液?？扇苡诩状己虳MSO；后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無(wú)毒性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸；短期保存：4℃干燥避光長(zhǎng)期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.活題成像分析1）用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。2）用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.）。D-熒光素鉀鹽檢測(cè)是個(gè)人合作嗎？常州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明

D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸。無(wú)錫體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    附錄ⅧB(niǎo)），與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對(duì)照液比較，不得更濃（）。干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過(guò)%（附錄ⅧL）。鋅鹽取本品，加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后，加稀鹽酸2ml，搖勻，濾過(guò)，濾液中加亞鐵**鉀試液1ml，不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴，點(diǎn)于濾紙上，即生成黃色斑點(diǎn)，趁濕置溴蒸氣中，1分鐘后再使與氨蒸氣接觸，斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光，用大量的水稀釋后仍極明顯；但加酸使成酸性后，熒光即消失；再加堿使成堿性，熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）。6含量測(cè)定編輯取本品約，精密稱(chēng)定，加水20ml溶解后，加稀鹽酸5ml使熒光素析出，用丁醇－氯仿(1:1)提取4次，每次20ml，合并提取液，用水10ml洗滌，洗液再用異丁醇－氯仿(1:1)5ml振搖提取，合并提取液，置105℃恒重的容器中，在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干，殘?jiān)靡掖?0ml溶解后，再置水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，精密稱(chēng)定，殘?jiān)亓颗c相乘，即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物，分子式為C20H10Na2O5，橙紅色粉末，無(wú)氣味，有吸濕性；易溶于水，溶液呈黃紅色，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。無(wú)錫體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用