徐州游離酸D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-19

    這是一種小分子(19kDa)單體酶,具有獨(dú)特的底物,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著***的應(yīng)用前景,為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)。可將這些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng),即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,更精細(xì)的NanoLuc?亞基,LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,重組為一個(gè)明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測(cè)定;也可以和HiBiT一樣高,從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。南京翌科生物科技有限公司的D-熒光素鉀鹽測(cè)試怎么樣?徐州游離酸D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    通過(guò)開發(fā)新的方法來(lái)改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué),例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理,并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè)。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化。通過(guò)將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鉀鹽的測(cè)試方法有哪幾種?

    產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,構(gòu)建原位**模型,之后注入熒光素底物,通過(guò)IVIS系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評(píng)價(jià)等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。注:在抗**藥物藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測(cè)需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小,受**生長(zhǎng)所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很***的評(píng)價(jià)**生長(zhǎng),在抗**藥效評(píng)價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測(cè)**生長(zhǎng)。D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報(bào)告基因分析;高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO。

    從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級(jí)純()應(yīng)用:1)活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析;2)***用于報(bào)告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1)配制成100mM的儲(chǔ)存液(200×,濃度30mg/ml)。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,配制工作液(終濃度150μg/mL)。3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無(wú)殘留。4)圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析(或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào))。D-熒光素鉀鹽注:螢光素、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽。Protocol2:Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光。

    可用于需要低檢測(cè)限的測(cè)定具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,簡(jiǎn)單且均一的生物發(fā)光測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基的使用兼容高斯熒光素酶近年來(lái),其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),可通過(guò)氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光。來(lái)自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來(lái)。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒使用專有的發(fā)光配方來(lái)定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),產(chǎn)***光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測(cè)板之間提供一致的信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑(Renillareniformis)分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,產(chǎn)生480nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似。D-熒光素鉀鹽測(cè)試方法是體外生物發(fā)光檢測(cè)。泰州體外研究D-熒光素鉀鹽公司

D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存條件是-20℃干燥避光。徐州游離酸D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一、活題成像技術(shù)簡(jiǎn)介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測(cè)量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移以及對(duì)藥物的反應(yīng)。在藥效學(xué)評(píng)價(jià)方面,熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動(dòng)物水平上進(jìn)行長(zhǎng)期療效跟蹤觀察。利用無(wú)創(chuàng)傷活題成像對(duì)哎細(xì)胞生長(zhǎng)的檢測(cè),可對(duì)哎癥治的好之前和過(guò)程中的哎細(xì)胞的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)和評(píng)估。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光,不需要激發(fā)光,但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶的底物熒光素,約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素。徐州游離酸D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號(hào)江蘇生命科技園F7棟301-3室,是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù)、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司。翌科生物作為翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù)、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的企業(yè)之一,為客戶提供良好的外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù)。翌科生物始終關(guān)注自身,在風(fēng)云變化的時(shí)代,對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使翌科生物在行業(yè)的從容而自信。