包括熒光素酶和ATP水平分析;報(bào)告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.)。做D-熒光素鉀鹽測試工作液是先用現(xiàn)配。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度
注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2)注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測時(shí)間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測,盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4妗?)對于檢測靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會(huì)對熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測。7)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途!泰州ATPD-熒光素鉀鹽發(fā)射波長D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測。
具體實(shí)驗(yàn)流程:注:該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性,不適用于對細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測。1.實(shí)驗(yàn)***天,消化并接種細(xì)胞(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞)于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,置于5%CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2.等細(xì)胞密度達(dá)到70%時(shí)用Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)染方法,如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可)。3.轉(zhuǎn)染24-36h后,吸取培養(yǎng)液,用預(yù)冷的PBS(無鈣和鎂離子)洗滌細(xì)胞。注:熒光酶的酶促反應(yīng)會(huì)被痕量的鈣所抑制,故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì)。4.在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞。5.在細(xì)胞裂解期間,準(zhǔn)備足量的ml微量離心管,將ATPbuffer與luciferinbuffer以1:,每管100μl。6.依次取等體積的細(xì)胞裂解液(100μl)至步驟5中的離心管中,迅速混勻,在發(fā)光儀(Luminometer)上讀取吸光值。注:發(fā)光反應(yīng)會(huì)迅速衰減,將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7.確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。
熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段,可以對整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析:將不同類型的細(xì)胞(骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等)標(biāo)記上(即表達(dá))熒光素酶,就可以用高敏感度的CCD相機(jī)進(jìn)行對動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行活ti觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如熒光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對包括影響在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如,熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可以用含有熒光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用熒光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病。熒光素酶還可以作為“報(bào)告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,例如,用于在轉(zhuǎn)染過熒光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平;這一技術(shù)被稱為報(bào)告基因檢測法或熒光素酶檢測法(LuciferaseAssay)。熒光素酶是一個(gè)熱敏感蛋白,因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護(hù)能力。做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜。
重組為一個(gè)明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定;也可以和HiBiT一樣高,從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司怎么樣?鹽城游離酸D-熒光素鉀鹽活題成像原理
D-熒光素也常用于身體的外部研究。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度
通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號(hào)動(dòng)力學(xué),例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺(tái)的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度
南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號(hào)江蘇生命科技園F7棟301-3室,是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測試劑、非編碼 RNA 提取與檢測試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司。翌科生物作為翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測試劑、非編碼 RNA 提取與檢測試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的企業(yè)之一,為客戶提供良好的外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測試劑,轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù)。翌科生物始終關(guān)注自身,在風(fēng)云變化的時(shí)代,對自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使翌科生物在行業(yè)的從容而自信。