熒光定量 PCR 儀應用領域:基礎科研基因表達分析:研究特定基因在不同組織、細胞以及不同生理狀態(tài)或處理條件下的表達水平,有助于深入理解基因的功能和調控機制?;蚬δ苎芯浚和ㄟ^定量分析基因表達的變化,探討基因在細胞增殖、分化、凋亡等過程中的作用,以及基因之間的相互調控關系。農業(yè)研究:作物遺傳改良:檢測植物基因組中的突變和表達量變化,評估作物的生長發(fā)育情況和適應性,為作物品種選育和遺傳改良提供依據(jù)。植物病蟲害檢測:快速檢測植物病原體,如病毒、細菌、等,有助于及時采取防治措施,保障農作物產量和質量。光學系統(tǒng):如激發(fā)光源的強度和穩(wěn)定性、熒光探測器的靈敏度和噪聲水平等。96孔熒光定量PCR儀品牌
熒光標記探針法原理:使用一種特異性的熒光標記探針,它能與目標 DNA 序列雜交。探針的 5' 端標記有熒光報告基團,3' 端標記有熒光淬滅基團。在游離狀態(tài)下,報告基團發(fā)出的熒光會被淬滅基團吸收,無法檢測到熒光信號。當 PCR 反應進行時,DNA 聚合酶在延伸引物的過程中,會將探針水解,使報告基團與淬滅基團分離,報告基團發(fā)出的熒光信號就可以被儀器檢測到。每擴增一條 DNA 鏈,就會有一個探針被水解,釋放出一個熒光信號,熒光信號的強度與 PCR 產物的數(shù)量成正比。過程:在 PCR 反應的退火階段,熒光標記探針會與目標 DNA 序列特異性結合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針從 5' 端開始逐個水解,使報告基團游離出來,產生熒光信號。儀器會在每個循環(huán)的延伸階段檢測熒光信號的強度,隨著 PCR 反應的進行,熒光信號逐漸增強,同樣可以得到 Ct 值。定量依據(jù):與熒光染料法類似,通過標準品建立標準曲線,根據(jù)待測樣本的 Ct 值在標準曲線上計算出起始模板量。由于熒光標記探針具有特異性,能與特定的目標序列雜交,因此可以更準確地對目標基因進行定量分析,減少非特異性擴增的干擾。無錫96孔熒光定量PCR儀廠家供應若溫度控制不準確,會導致 PCR 反應效率降低、特異性下降,產生非特異性擴增,影響熒光信號準確性;
熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護和保養(yǎng)可以延長其使用壽命,保證儀器的性能和檢測結果的準確性。日常維護儀器清潔:定期清理儀器表面的灰塵和污漬,使用干凈的軟布擦拭。對于儀器內部,可使用無絨布或棉簽輕輕擦拭光路系統(tǒng)、反應模塊等部件,避免刮傷。注意不要讓液體流入儀器內部。檢查儀器狀態(tài):每次使用前檢查儀器的各項參數(shù)是否正常,如熒光檢測系統(tǒng)、加熱制冷模塊等。查看儀器的指示燈、顯示屏是否正常工作,如有異常及時記錄并聯(lián)系維修人員。及時清理樣品殘留:實驗結束后,及時清理反應板和樣品槽中的殘留樣品,防止樣品干涸后形成頑固污漬,影響后續(xù)實驗??墒褂脺睾偷那鍧崉┎潦?,然后用蒸餾水沖洗干凈,再用干凈的軟布擦干。
熒光定量 PCR 儀的檢測結果會受到多種因素的影響,包括儀器設備、試劑質量、樣本處理以及實驗操作等方面,。加樣準確性:在配制反應體系和加樣過程中,移液器的使用不準確會導致試劑和樣本的加入量出現(xiàn)偏差。例如,加樣量過多或過少都會影響反應體系中各成分的濃度,進而影響擴增效率和檢測結果的準確性。反應體系配制:反應體系中各成分的比例要準確配制。如果引物、探針、酶、dNTP 等成分的濃度過高或過低,都會影響 PCR 反應的特異性和效率,導致檢測結果不準確。此外,反應體系中若存在氣泡,可能會影響熱傳遞和熒光信號的檢測。實驗環(huán)境:實驗環(huán)境的溫度、濕度等條件也會對實驗結果產生影響。例如,環(huán)境溫度過高或過低可能影響酶的活性和反應速率,濕度較大可能導致試劑吸潮變質,從而影響檢測結果的穩(wěn)定性和準確性。能夠準確地識別出微弱的熒光信號變化,從而實現(xiàn)對低水平核酸表達的檢測。
熒光信號強度異常信號值不穩(wěn)定:在相同的實驗條件下,對同一標準樣品進行多次檢測,若熒光信號強度波動較大,如原本穩(wěn)定的信號值出現(xiàn)明顯的忽高忽低,且排除了樣品制備、反應體系等其他因素的影響,可能是光路系統(tǒng)出現(xiàn)問題,需要校準。信號值偏低或偏高:與以往正常實驗結果相比,熒光信號強度明顯偏低或偏高。例如,正常情況下某種樣品在特定循環(huán)數(shù)下的熒光值應該在一定范圍內,但現(xiàn)在檢測到的數(shù)值遠低于或遠高于該范圍,且排除了試劑、儀器參數(shù)設置等因素,可能是光路系統(tǒng)的熒光激發(fā)或檢測效率發(fā)生變化,需要對光路系統(tǒng)進行檢查和校準。激發(fā)光源能夠穩(wěn)定且有效地激發(fā) TET 熒光染料,使其發(fā)出足夠強的熒光信號。無錫VIC熒光定量PCR儀經銷商
能夠準確檢測食品中的轉基因成分,通過對轉基因作物中特定的基因序列進行定量分析;96孔熒光定量PCR儀品牌
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對 PCR 產物進行標記跟蹤,實時監(jiān)測反應過程的儀器。儀器特點:高靈敏度和特異性:能檢測極低拷貝數(shù)的核酸模板,對目標序列具有高度特異性,可減少假陽性和假陰性結果。準確 quantification:通過實時監(jiān)測熒光信號,實現(xiàn)對核酸模板的準確定量,結果準確可靠。高 throughput:可同時檢測多個樣品,大幅提高檢測效率,節(jié)省時間和成本。高度自動化:具備自動進樣、反應程序設置、數(shù)據(jù)采集和分析等功能,操作簡便,減少人為誤差。96孔熒光定量PCR儀品牌