FAM并不是一種特定的熒光定量PCR儀品牌或型號(hào),而是一種在熒光定量PCR中常用的熒光染料。FAM(Fluoresceinamidite)即羧基熒光素,具有高量子產(chǎn)率,在被特定波長(zhǎng)的光激發(fā)后會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光,其激發(fā)波長(zhǎng)通常在495nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)在520nm左右。由于其熒光特性穩(wěn)定且靈敏,被廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中,作為報(bào)告分子來(lái)對(duì)目標(biāo)DNA或RNA進(jìn)行定量檢測(cè)。很多熒光定量PCR儀都可以使用FAM染料進(jìn)行檢測(cè),例如賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。這些儀器通常配備有能激發(fā)FAM染料發(fā)光的光源以及能檢測(cè)其發(fā)射熒光的光學(xué)系統(tǒng)。以QuantStudio?1Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為例,它配備4種常用的激發(fā)和發(fā)射濾光片,包括FAM、VIC、ROX和Cy5,其激發(fā)光源為白光LED,激發(fā)范圍為455至530nm,可滿足FAM染料的激發(fā)需求。TET 的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)使其能夠在特定的熒光通道中被準(zhǔn)確檢測(cè)到,通常其激發(fā)波長(zhǎng)在 520 - 550nm 左右;徐州TET熒光定量PCR儀哪個(gè)好
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于多個(gè)行業(yè),以下是一些主要的應(yīng)用行業(yè):醫(yī)療診斷行業(yè)傳染病檢測(cè):可對(duì)多種傳染病病原體進(jìn)行檢測(cè)和定量分析,如、乙肝病毒、丙肝病毒、病毒等,幫助醫(yī)生及時(shí)準(zhǔn)確地診斷疾病,監(jiān)測(cè)病情發(fā)展,以及評(píng)估效果。遺傳病診斷:通過(guò)檢測(cè)特定基因的突變或拷貝數(shù)變化,診斷遺傳性疾病,如囊性纖維化、血友病、地中海貧血等,為遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供依據(jù)。診斷與監(jiān)測(cè):一方面,可檢測(cè)相關(guān)基因的突變、甲基化狀態(tài)或基因表達(dá)水平的變化,輔助的早期診斷和預(yù)后評(píng)估;另一方面,在過(guò)程中,通過(guò)監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞中特定基因的變化,評(píng)估效果,及時(shí)發(fā)現(xiàn)的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。鎮(zhèn)江EVA-Green熒光定量PCR儀代理商若核酸發(fā)生降解,會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增片段不完整,影響定量準(zhǔn)確性,降低檢測(cè)靈敏度。
試劑兼容性:選擇與常用試劑品牌兼容性好的儀器,避免因試劑與儀器不匹配而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定或無(wú)法進(jìn)行。一些儀器廠家會(huì)提供配套的試劑,以保證實(shí)驗(yàn)的比較好效果,如羅氏的熒光定量 PCR 儀與羅氏的 TaqMan 試劑配合使用,能發(fā)揮良好的性能。軟件功能:功能強(qiáng)大的軟件應(yīng)具備實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、數(shù)據(jù)分析、結(jié)果可視化等功能,并且操作界面友好,易于上手。例如,儀器軟件能夠自動(dòng)進(jìn)行基線校正、閾值設(shè)定,還能進(jìn)行基因表達(dá)差異分析、SNP 分型結(jié)果分析等。售后服務(wù):考慮儀器制造商的售后服務(wù)質(zhì)量,包括技術(shù)支持、維修保養(yǎng)、培訓(xùn)服務(wù)等。良好的售后服務(wù)可以幫助用戶解決在使用過(guò)程中遇到的問題,確保儀器的正常運(yùn)行。
VIC與 FAM 類似,是一種熒光報(bào)告基團(tuán),可標(biāo)記在引物或探針上用于熒光定量 PCR。它在 PCR 過(guò)程中,隨著引物或探針與目標(biāo) DNA 的結(jié)合以及 PCR 產(chǎn)物的擴(kuò)增,會(huì)發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光,其熒光信號(hào)強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的量成正比,通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo) DNA 的定量分析。特點(diǎn):激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)與 FAM 有所不同,激發(fā)波長(zhǎng)約為 538nm,發(fā)射波長(zhǎng)約為 554nm,熒光顏色為黃綠色。VIC 常用于多重?zé)晒舛?PCR 中,可與 FAM 等其他熒光染料同時(shí)使用,實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)不同目標(biāo)基因的同時(shí)檢測(cè),因?yàn)槠涔庾V特性與其他染料有較好的區(qū)分度,能避免熒光信號(hào)之間的相互干擾。TET 熒光定量 PCR 儀的熱循環(huán)系統(tǒng)能夠準(zhǔn)確地控制溫度的升降速率和保溫時(shí)間,PCR 反應(yīng)在溫度條件下進(jìn)行。
儀器提示或報(bào)錯(cuò)儀器軟件可能會(huì)提示光路系統(tǒng)出現(xiàn)故障或異常,如 “熒光信號(hào)異?!薄肮饴沸?zhǔn)錯(cuò)誤” 等報(bào)錯(cuò)信息。這是儀器自身檢測(cè)到光路系統(tǒng)存在問題,需要進(jìn)行校準(zhǔn)或維修的直接提示。儀器使用時(shí)間和環(huán)境因素使用時(shí)間:如果儀器已經(jīng)使用了較長(zhǎng)時(shí)間,如超過(guò)一年且頻繁使用,即使沒有出現(xiàn)明顯的異?,F(xiàn)象,也建議按照廠家的建議定期對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以確保儀器始終保持良好的性能。環(huán)境變化:儀器所處的環(huán)境發(fā)生較大變化,如溫度、濕度劇烈波動(dòng),或者儀器經(jīng)過(guò)搬運(yùn)、移動(dòng)后,可能會(huì)導(dǎo)致光路系統(tǒng)的部件發(fā)生微小位移或性能改變,此時(shí)也需要對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。而熒光探測(cè)器則能夠準(zhǔn)確地捕捉到這些微弱的熒光信號(hào),并將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào)或數(shù)字信號(hào)進(jìn)行分析。徐州TET熒光定量PCR儀哪個(gè)好
先進(jìn)的數(shù)據(jù)處理算法能去除噪聲、校正漂移,精確分析熒光信號(hào)變化,提高檢測(cè)靈敏度。徐州TET熒光定量PCR儀哪個(gè)好
TAMRA(四甲基羅丹明)常作為熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)中的淬滅基團(tuán)與其他熒光基團(tuán)搭配使用,如與 FAM 等供體染料配合。當(dāng)供體染料被激發(fā)時(shí),能量會(huì)轉(zhuǎn)移到 TAMRA 上并以非熒光形式耗散,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光信號(hào)的調(diào)控。在熒光定量 PCR 中,常利用這種能量轉(zhuǎn)移機(jī)制來(lái)檢測(cè) PCR 產(chǎn)物的生成。例如,在 TaqMan 探針中,F(xiàn)AM 標(biāo)記在探針的 5' 端,TAMRA 標(biāo)記在 3' 端,當(dāng)探針完整時(shí),F(xiàn)AM 的熒光被 TAMRA 淬滅;而在 PCR 延伸過(guò)程中,Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性會(huì)將探針?biāo)?,?FAM 與 TAMRA 分離,F(xiàn)AM 熒光恢復(fù),從而實(shí)現(xiàn)對(duì) PCR 產(chǎn)物的定量檢測(cè)。特點(diǎn):激發(fā)波長(zhǎng)約為 550nm,發(fā)射波長(zhǎng)約為 580nm,熒光顏色為紅色。TAMRA 具有較好的光穩(wěn)定性和較高的量子產(chǎn)率,能夠產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光信號(hào),并且與許多常用的熒光基團(tuán)具有良好的光譜兼容性,適用于多種熒光檢測(cè)平臺(tái)。徐州TET熒光定量PCR儀哪個(gè)好