熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護和保養(yǎng)可以延長其使用壽命,保證儀器的性能和檢測結果的準確性。長期維護:定期多方面檢查:每年或每兩年對儀器進行一次多方面的檢查和維護,包括機械部件、電子元件、制冷系統(tǒng)等的檢查和保養(yǎng)。由專業(yè)的維修工程師對儀器進行深度保養(yǎng),及時發(fā)現(xiàn)并更換潛在的故障部件,確保儀器的整體性能處于良好狀態(tài)。存放環(huán)境維護:如果儀器長時間不使用,應將其存放在干燥、清潔、溫度適宜的環(huán)境中,避免儀器受到潮濕、灰塵、震動和電磁干擾等影響。定期通電開機,讓儀器運行一段時間,以保持各部件的正常性能。在多重 PCR 反應中對不同的目標序列進行特異性標記和檢測。南京定量熒光定量PCR儀代理商
選擇適合自己的熒光定量 PCR 儀,需要綜合考慮多個因素,實驗類型:如果是進行常規(guī)的基因表達分析、病原體定量檢測,普通的單通道或多通道熒光定量 PCR 儀即可滿足需求。例如,賽默飛世爾的 QuantStudio 3,適用于基礎的基因表達和病原體檢測實驗。若是涉及到復雜的多重 PCR 實驗、SNP 基因分型,則需要選擇具有更多熒光通道、更高分辨率的儀器,如羅氏的 LightCycler 480,可同時檢測多個熒光信號,適用于多重分析。通量要求:根據(jù)實驗樣本數(shù)量來選擇。對于樣本量較少的實驗,如小型實驗室的科研項目或臨床診斷的少量樣本檢測,96 孔板的熒光定量 PCR 儀就足夠,如伯樂的 CFX96。而對于高通量的檢測需求,如大規(guī)模的基因篩查、藥物研發(fā)中的大量樣本篩選,可能需要選擇 384 孔板的儀器,如 ABI 7900HT,能提高實驗效率,減少實驗成本。徐州FAM熒光定量PCR儀能夠準確檢測食品中的轉基因成分,通過對轉基因作物中特定的基因序列進行定量分析;
TAMRA(四甲基羅丹明)常作為熒光共振能量轉移(FRET)中的淬滅基團與其他熒光基團搭配使用,如與 FAM 等供體染料配合。當供體染料被激發(fā)時,能量會轉移到 TAMRA 上并以非熒光形式耗散,從而實現(xiàn)對熒光信號的調(diào)控。在熒光定量 PCR 中,常利用這種能量轉移機制來檢測 PCR 產(chǎn)物的生成。例如,在 TaqMan 探針中,F(xiàn)AM 標記在探針的 5' 端,TAMRA 標記在 3' 端,當探針完整時,F(xiàn)AM 的熒光被 TAMRA 淬滅;而在 PCR 延伸過程中,Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針水解,使 FAM 與 TAMRA 分離,F(xiàn)AM 熒光恢復,從而實現(xiàn)對 PCR 產(chǎn)物的定量檢測。特點:激發(fā)波長約為 550nm,發(fā)射波長約為 580nm,熒光顏色為紅色。TAMRA 具有較好的光穩(wěn)定性和較高的量子產(chǎn)率,能夠產(chǎn)生較強的熒光信號,并且與許多常用的熒光基團具有良好的光譜兼容性,適用于多種熒光檢測平臺。
多重熒光定量 PCR:在同一反應體系中同時檢測多個目標基因時,VIC 熒光染料可與其他不同發(fā)射波長的熒光染料(如 FAM、ROX 等)組合使用。由于 VIC 的光譜特性與其他染料有較好的區(qū)分度,能避免熒光信號之間的相互干擾,從而實現(xiàn)對多個不同目標基因的同時定量分析。例如,在疾病診斷中,可同時檢測多個與疾病相關的基因標志物,提高診斷的準確性和全面性。SNP 基因分型:在單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測中,通過設計特定的引物和探針,利用 VIC 熒光染料標記不同等位基因的探針。在 PCR 反應過程中,根據(jù)不同等位基因與探針的特異性結合,產(chǎn)生不同的熒光信號,從而實現(xiàn)對 SNP 位點的分型。這種方法具有較高的準確性和靈敏度,可用于疾病關聯(lián)研究、藥物遺傳學研究以及個體遺傳特征分析等領域。激發(fā)光源能夠穩(wěn)定且有效地激發(fā) TET 熒光染料,使其發(fā)出足夠強的熒光信號。
實時熒光定量 PCR 儀在多個領域都有廣泛的應用,以下是一些主要的應用領域:疾病診斷:可對病毒、細菌等病原體的核酸進行檢測,如、病毒、結核桿菌等,實現(xiàn)疾病的早期診斷。例如,在期間,實時熒光定量 PCR 儀是檢測核酸的重要工具,通過檢測患者樣本中病毒的核酸量,判斷是否以及的程度。疾病監(jiān)測:對于一些慢性疾病,如、心血管疾病等,實時熒光定量 PCR 儀可監(jiān)測相關基因的變化,輔助醫(yī)生了解疾病的發(fā)展進程、效果以及預測疾病的復發(fā)風險。例如,通過檢測患者體內(nèi)特定基因突變的頻率和拷貝數(shù),評估的惡性程度和后的殘留情況。藥物研發(fā):在藥物研發(fā)過程中,可用于研究藥物對基因表達的影響,篩選具有潛在作用的藥物靶點。同時,還可監(jiān)測藥物過程中患者體內(nèi)基因的變化,為個體化提供依據(jù)。例如,通過檢測患者在使用某種藥物前后腫瘤細胞中相關基因的表達水平,判斷藥物是否有效,并調(diào)整方案。而熒光定量 PCR 技術可以在數(shù)小時內(nèi)得出結果,提高了診斷效率。徐州FAM熒光定量PCR儀
可快速檢測食品中的有害微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等。南京定量熒光定量PCR儀代理商
基因表達分析:可以精確測定不同組織、不同發(fā)育階段以及不同生理狀態(tài)下基因的表達水平,幫助研究人員了解基因在生物體內(nèi)的功能和調(diào)控機制。例如,研究胚胎發(fā)育過程中某些關鍵基因的表達變化,揭示胚胎發(fā)育的分子機制?;蚍中停簩魏塑账岫鄳B(tài)性(SNP)等基因變異進行分型,用于遺傳疾病的診斷、藥物遺傳學研究以及生物進化分析等。例如,通過檢測個體在特定基因位點上的 SNP 類型,預測其對某些藥物的反應,實現(xiàn)個體化用藥。微生物研究:用于對環(huán)境中的微生物進行定量分析,了解微生物群落結構和動態(tài)變化。例如,研究土壤、水體等環(huán)境中微生物的種類和數(shù)量,以及在不同環(huán)境條件下微生物群落的演替規(guī)律,為環(huán)境保護和生態(tài)研究提供依據(jù)。南京定量熒光定量PCR儀代理商