楊浦區(qū)小鼠疾病動(dòng)物模型建模

急性肺損傷模型大鼠(右圖)與對(duì)照組大鼠（左圖）肺組織HE染色6.模型又名支氣管。支氣管是由多種細(xì)胞及細(xì)胞組分參與的慢性氣道炎癥，此種炎癥常伴隨引起氣道反應(yīng)性增高，導(dǎo)致反復(fù)發(fā)作的喘息、氣促、胸悶和/或咳嗽等癥狀，多在夜間和/或凌晨發(fā)生，此類癥狀常伴有而多變的氣流阻塞，可以自行或通過而逆轉(zhuǎn)。6.1小鼠模型建立SPF級(jí)Balb/c雌性小鼠，體重約20g。采用OVA致敏誘導(dǎo)建立模型。OVA致敏誘導(dǎo)的模型：分別于第1、8、15天腹腔注射OVA混懸液（含OVA1g/L，氫氧化鋁5g/L）0.2ml，實(shí)驗(yàn)第21天起將小鼠置于霧化激發(fā)器內(nèi)，給予2%OVA生理鹽水霧化激發(fā)模型應(yīng)適用于多數(shù)研究者使用，容易復(fù)制，實(shí)驗(yàn)中便于操作和采集各種標(biāo)本。楊浦區(qū)小鼠疾病動(dòng)物模型建模

糖尿病動(dòng)物模型（animalmodelofdiabetesmellitus）1、病毒誘發(fā)法：DBA/2雌性小鼠，皮下接種腦炎、心肌炎病毒M型變異株4～7d后出現(xiàn)明顯的，伴有血中及胰腺中胰島素含量降低。2、四氧嘧啶法：SD大鼠200g左右，雌雄不限，四氧嘧啶靜脈注射1次，觀察血糖>300mg/dl，持續(xù)2周可以認(rèn)為造模成功。3、鏈脲菌素法：將鏈脲菌素在酸化生理鹽水中溶解成1％溶液，給大鼠靜脈注射。觀察血糖>400mg/dl，持續(xù)3d即可認(rèn)為是造模成功。4、高糖飼喂誘發(fā)法：選用SHR/NLHCP大鼠5周齡，喂飼含54％蔗糖飲食。黃浦區(qū)生殖疾病動(dòng)物模型建模小鼠疾病模型研究也是人相關(guān)疾病藥物研發(fā)的起點(diǎn)。

誘導(dǎo)模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠、豚鼠、大鼠造模試劑：煙霧、空氣污染物及有害氣體（PM2.5、臭氧、二氧化氮）、脂多糖、彈性蛋白酶獲得方式：動(dòng)物全身長時(shí)間放置在密閉容器內(nèi)，暴露于煙霧、空氣污染物或者有害氣體；氣管內(nèi)滴注脂多糖或者彈性蛋白酶。模型特點(diǎn)：煙霧、空氣污染物或者有害氣體誘導(dǎo)模型使用的物質(zhì)、暴露的劑量、頻次和時(shí)間不盡相同；脂多糖造模時(shí)間短，可用來模擬急性加重反應(yīng)，但不能反應(yīng)慢性病變的過程，通常需要和其他造模方法聯(lián)用。2.基因模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：α1-抗胰蛋白酶等基因敲除小鼠獲得方式：直接購買模型特點(diǎn)：α1-抗胰蛋白酶基因敲除小鼠是經(jīng)典的COPD轉(zhuǎn)基因模型，更準(zhǔn)確地理解易感基因的致病機(jī)制。

其可與dna鏈交叉連接，顯示出細(xì)胞毒作用。溶解后在體內(nèi)無需載體轉(zhuǎn)運(yùn)，即可通過帶電的細(xì)胞膜。由于細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度低(4mmol/l)，氯離子為水所取代，電荷呈陽性，具有類似烷化劑雙功能基團(tuán)的作用，可與細(xì)胞核內(nèi)dna的堿基結(jié)合，形成三種形式的交聯(lián)，造成dna損傷，破壞dna復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，高濃度時(shí)也抑制rna及蛋白質(zhì)的合成。順鉑具有抗*譜廣、乏氧細(xì)胞有效、作用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，已普遍用于***睪丸*、卵巢*、子宮*、膀胱*、頸部*、前列腺*、腦*等，療效***。但順鉑用于****有一定的毒性，會(huì)引起副作用，與卵巢的損害有直接關(guān)系，有研究表明順鉑可誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡。能夠準(zhǔn)確模擬人相關(guān)特定功能與疾病特征。

誘發(fā)性**模型的原理是利用外源性致*因素引起細(xì)胞遺傳特性異常而呈現(xiàn)出異常生長和高增殖活性，形成**。致*因素主要有化學(xué)性、物理性及生物性致*物，而化學(xué)性致*物(chemicalcarcinogens)**常見，已確知的多達(dá)一千余種，用于誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性**的種類亦很多，如苯并薩，申基膽菌、聯(lián)苯胺、亞硝胺類、黃曲霉***類。各種致癢物的致*強(qiáng)度、致*譜等特性相差較大，同一種致*物經(jīng)不同途徑給藥所致**部位或類型可有很大差異。有些化學(xué)性致*物具有明顯的親***或組織特性。因此，實(shí)驗(yàn)工作中應(yīng)根據(jù)需要選用適當(dāng)致*物和致*途徑，并確定其他影響因素或?qū)嶒?yàn)條件?；驹?利用外源性致*物引起細(xì)胞遺傳特性改變，從而出現(xiàn)異常生長和高增殖活性細(xì)胞形成**。外源性致*物主要有化學(xué)性、物理性(如放射性物質(zhì))及生物性(如誘發(fā)動(dòng)物**的病毒),其中以化學(xué)性致*物**為常用小鼠是人類疾病理想的動(dòng)物模型不僅因?yàn)樾∈笤谏砩吓c人類極為相似而且小鼠的遺傳資源非常豐富。普陀區(qū)視覺疾病動(dòng)物模型建模

如何定義好的小鼠疾病模型？楊浦區(qū)小鼠疾病動(dòng)物模型建模

步驟3、pmsg處理c57bl/6雌性小鼠(6周齡，平均體重20g)，46h后注射hcg，與雄性小鼠合籠交配，次日取受精卵進(jìn)行顯微注射，將步驟1的grna1、grna2、cas9蛋白以及線性化后的打靶載體一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠體內(nèi)，產(chǎn)出小鼠，即f0代小鼠。上述步驟中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl，cas9蛋白購自newenglandbiolabs，貨號(hào)為m0386m。步驟4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，鑒定是否為嵌合體。本發(fā)明用于f0代小鼠pirb基因pcr鑒定的特異性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物大小為，primers2對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物為。用于f0代小鼠測(cè)序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。楊浦區(qū)小鼠疾病動(dòng)物模型建模