PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)抗體制備

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2025-09-01

宿主細(xì)胞蛋白來(lái)源中往往同時(shí)存在核酸，胞膜脂類，培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會(huì)干擾總蛋白的檢測(cè)準(zhǔn)確性，需要在檢測(cè)之前進(jìn)行純化前處理，同時(shí)對(duì)總蛋白檢測(cè)方法進(jìn)行方法學(xué)確認(rèn)。HCP是一種多蛋白質(zhì)的混合物，總蛋白定量方法之間檢測(cè)結(jié)果會(huì)存在一定程度的差異，這也是導(dǎo)致HCP免疫檢測(cè)方法結(jié)果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測(cè)結(jié)果差異較大，一般同時(shí)采用2種以上經(jīng)過(guò)確認(rèn)的方法檢測(cè)，再取均值。總蛋白檢測(cè)方法的定量限一般只能達(dá)到μg/mL水平,但是HCP檢測(cè)試劑盒的產(chǎn)品校準(zhǔn)品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產(chǎn)品校準(zhǔn)品中存在稀釋誤差，需要對(duì)產(chǎn)品校準(zhǔn)品進(jìn)行重新標(biāo)定賦值。
SHENTEK? AutoElisa-4K HCP 檢測(cè)自動(dòng)化系統(tǒng)可減少人為誤差，滿足 21 CFR Part 11 數(shù)據(jù)管理要求。PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)抗體制備

PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)抗體制備,宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)

對(duì)宿主細(xì)胞蛋白殘留的監(jiān)測(cè)是生物藥物生產(chǎn)中一個(gè)至關(guān)重要的質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute, CQA），它要求在藥物的開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)階段對(duì)HCP的存在進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的目標(biāo)蛋白純度逐漸提高，相應(yīng)地，HCP的含量在持續(xù)降低。這使得在富含目標(biāo)蛋白，如單抗、融合蛋白等下游工藝樣品在對(duì)HCP進(jìn)行分析和監(jiān)測(cè)就變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，高效的HCP富集材料和技術(shù)變得尤為關(guān)鍵。SHENTEK®AbunProteoX是一種基于磁珠構(gòu)建的親和配體，可高效識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)蛋白。利用磁性納米顆粒的獨(dú)特性質(zhì)，能夠快速且有效地捕獲HCP，顯著提高檢測(cè)靈敏度。此外，親和配體的普遍適用性使得AbunProteoX在處理多種生物樣本時(shí)都能表現(xiàn)出色，確保了在樣品中存在高濃度目標(biāo)蛋白時(shí)對(duì)低濃度HCP進(jìn)行質(zhì)譜、電泳等檢測(cè)分析的準(zhǔn)確性和可靠性。 定制化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)方法對(duì)比湖州申科生物目前已承接常見(jiàn)宿主類型的HCP定制化開(kāi)發(fā)，如期交付率達(dá)到100%。

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湖州申科生物CHO-K1 HCP 殘留檢測(cè)試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）基于固相酶聯(lián)免疫吸附分析法，適用于基于CHO-K1細(xì)胞生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白的定量檢測(cè)。該分析方法通過(guò)在預(yù)包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標(biāo)板中加入校準(zhǔn)品或待測(cè)樣品、HRP標(biāo)記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗進(jìn)行共孵育。洗滌后，加入TMB底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，再使用終止液終止酶催化反應(yīng)。利用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)讀吸光度，其吸光度與校準(zhǔn)品或待測(cè)樣品中的HCPs濃度成正相關(guān)，通過(guò)校準(zhǔn)品擬合的劑量-反應(yīng)曲線即可計(jì)算得出待測(cè)樣品中HCPs的濃度。本試劑盒對(duì)待測(cè)樣品無(wú)需進(jìn)行特殊處理，只需通過(guò)合適的稀釋比例進(jìn)行適用性驗(yàn)證即可直接使用。本試劑盒操作步驟少，快速，檢測(cè)專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。

畢赤酵母（Pichia pastoris）是第二代酵母表達(dá)系統(tǒng)中的代表性菌株，是美國(guó)FDA認(rèn)定的GRAS（Generally Recognized As Safe）微生物，具有表達(dá)水平高，產(chǎn)物活性好，培養(yǎng)成本低，易擴(kuò)大為工業(yè)化生產(chǎn)等特點(diǎn)。在生物制藥領(lǐng)域，酶制劑、胰島素、表皮生長(zhǎng)因子、膠原蛋白等多種生物制劑已經(jīng)通過(guò)畢赤酵母系統(tǒng)進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。與其他產(chǎn)品雜質(zhì)一樣，畢赤酵母宿主殘留蛋白（HCP）可能對(duì)生物制品的安全性和有效性產(chǎn)生不利影響，因此在生產(chǎn)監(jiān)測(cè)、產(chǎn)品放行等過(guò)程中需要對(duì)其進(jìn)行定量研究并進(jìn)行嚴(yán)格控制。SHENTEK®畢赤酵母HCP殘留檢測(cè)試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）是湖州申科生物自主研發(fā)、具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的、實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵試劑全國(guó)產(chǎn)化的畢赤酵母HCP通用檢測(cè)試劑盒。本試劑盒適用于基于GS115、X33等在內(nèi)的畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白的定量檢測(cè)，操作步驟少、快速，檢測(cè)專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。
不同技術(shù)平臺(tái)獲得的抗體覆蓋率水平不一樣，一般覆蓋率水平從高到低依次IMBS-MS>IMBS-2D>2D-Western Blot。

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LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，憑借其超高的分辨率與準(zhǔn)確度在生物分析領(lǐng)域占據(jù)重要地位。該技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測(cè)，還可通過(guò)建立專屬蛋白質(zhì)譜庫(kù)準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關(guān)鍵支撐。不過(guò)，其應(yīng)用過(guò)程中面臨的關(guān)鍵挑戰(zhàn)在于，如何優(yōu)化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規(guī)范中對(duì)產(chǎn)品放行檢測(cè)的嚴(yán)格要求。在質(zhì)譜檢測(cè)環(huán)節(jié)，通過(guò)引入表征清晰的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，能夠準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開(kāi)發(fā)產(chǎn)品專屬的 HCP ELISA 檢測(cè)方法提供有力數(shù)據(jù)支持，還能助力工藝優(yōu)化升級(jí)，加速推動(dòng)生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)程。
湖州申科自主研發(fā)IMBS抗體覆蓋率檢測(cè)法及低豐度HCP富集技術(shù)，合作完成多項(xiàng)課題并發(fā)表成果。上海宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)性能驗(yàn)證

湖州申科HCP試劑盒開(kāi)發(fā)經(jīng)抗原表征、抗體制備到體系驗(yàn)證，全流程符合法規(guī)要求。PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)抗體制備

美國(guó)藥典<1132>章節(jié) 和歐洲藥典<2.6.34>章節(jié)建議對(duì)于即將進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)的（臨床III期及以后）或生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的生物制品采用定制化ELISA試劑盒進(jìn)行宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)，原因可能是：①確保檢測(cè)方法可以充分覆蓋實(shí)際工藝產(chǎn)生的HCPs，避免漏檢關(guān)鍵雜質(zhì)；②支持更準(zhǔn)確的免疫原性和安全性評(píng)估；③提供真實(shí)的工藝表征數(shù)據(jù)，而非推測(cè)數(shù)據(jù)；④滿足商業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制的方法一致性。此外，對(duì)目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的HCP ELISA商業(yè)化試劑盒進(jìn)行了測(cè)試，并與HCP ELISA定制化試劑盒進(jìn)行對(duì)比，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同商業(yè)化試劑盒檢測(cè)同一樣品的檢測(cè)值差異大，且準(zhǔn)確性均低于定制化試劑盒，表明定制化試劑盒更能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制所需。
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