成都宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比

影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一是方法選擇。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法（LC-MS法）是目前HCP檢測的兩大常用方法。文獻(xiàn)統(tǒng)計顯示，目前對于總HCP定量，ELISA仍是主流方法；MS法作為對特定蛋白（例如，高風(fēng)險蛋白）的鑒定和定量，已成為重要的互補手段。此外檢測過程中使用的試劑和耗材的質(zhì)量直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。低質(zhì)量的試劑可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果。例如，抗體的特異性和親和力不足，可能導(dǎo)致ELISA檢測中的交叉反應(yīng)；抗原代表性不強或是抗體覆蓋率低，可能會導(dǎo)致漏檢；稀釋液抗干擾能力弱，可能影響檢測準(zhǔn)確性。案例研究表明，采用定制化方法替代原有商業(yè)化試劑盒后，抗原代表性和抗體覆蓋率明顯提高，HCP檢測值整體升高。

湖州申科生物致力于提供符合嚴(yán)格法規(guī)要求的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA檢測試劑盒。為確保產(chǎn)品滿足生物制品（如抗體藥、疫苗）申報（如IND/BLA）的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)，申科構(gòu)建了全流程依規(guī)開發(fā)的質(zhì)量體系：整個開發(fā)過程嚴(yán)格遵循ISO 13485質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并滿足用戶審計要求。其開發(fā)流程明確包含三個關(guān)鍵階段：①HCP殘留定量檢測參考品開發(fā)：關(guān)鍵在于建立可靠的HCP抗原參考品，涵蓋抗原的表征、量值溯源與賦值、均一性和穩(wěn)定性考察等，確保檢測的準(zhǔn)確性與代表性。②高質(zhì)量大批量抗體制備：通過優(yōu)化的HCP抗原動物免疫策略，結(jié)合嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目贵w質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（如建立標(biāo)準(zhǔn)、覆蓋率驗證）和穩(wěn)定的制備工藝，生產(chǎn)具有高特異性和廣覆蓋度的檢測抗體，保證檢測的特異性和靈敏度。③檢測體系開發(fā)及驗證：進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測體系開發(fā)與驗證工作，其驗證方案符合ICH指導(dǎo)原則及藥典關(guān)于分析方法驗證的標(biāo)準(zhǔn)要求。同時，嚴(yán)格執(zhí)行物料質(zhì)控，并在潔凈車間環(huán)境中進(jìn)行生產(chǎn)，確保試劑盒方法的穩(wěn)健性、重現(xiàn)性與法規(guī)符合性。這一從抗原源頭到成品體系的標(biāo)準(zhǔn)化、合規(guī)化開發(fā)流程，是湖州申科HCP檢測產(chǎn)品品質(zhì)與可靠性的根本保障。

湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內(nèi)容，依托公司深耕生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年經(jīng)驗，針對LC-MS檢測HCPs方法進(jìn)行了評價與優(yōu)化。同時通過對LC-MS檢測HCPs整體流程建立完整的質(zhì)控，建立起一套抗干擾能力強、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、結(jié)果真實可靠的LC-MS檢測HCPs標(biāo)準(zhǔn)方法。檢測技術(shù)平臺分成樣品制備、質(zhì)譜檢測、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗證四部分，已使用LC-MS平臺進(jìn)行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細(xì)胞HCPs抗體覆蓋率的檢測分析。

為什么定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測的優(yōu)先選擇？原因之一是建立定制化檢測體系，更滿足商業(yè)化生產(chǎn)HCP工藝雜質(zhì)控制要求。在HCP校準(zhǔn)品和HCP抗體兩大關(guān)鍵試劑組分滿足要求的前提下，定制化方法的建立和優(yōu)化是基于真實純化中間品和原液樣品進(jìn)行，通過優(yōu)化檢測條件，提高對低濃度HCPs的檢測靈敏度，滿足工藝驗證和過程控制要求。在臨床三期，生產(chǎn)工藝需要進(jìn)行系統(tǒng)驗證，以確保其穩(wěn)定性和可重復(fù)性。定制化HCP ELISA檢測方法能夠更準(zhǔn)確地監(jiān)測生產(chǎn)工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供有力支持。在過程控制中，通過工藝特異型的HCP ELISA檢測方法，可以實時監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，具備更強的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，及時發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)風(fēng)險，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

HCP是由宿主細(xì)胞（通常是哺乳動物細(xì)胞或微生物）產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)具有潛在的風(fēng)險，可能會影響藥物的安全性和有效性。因此，HCP殘留量是生物藥物中一個關(guān)鍵質(zhì)量屬性，要求在藥物的開發(fā)和生產(chǎn)階段對HCP的存在進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的純度在逐漸提高，HCPs總量和種類卻在持續(xù)降低，這使得對HCP的分析和監(jiān)測工作變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，開發(fā)高效的HCP富集材料和技術(shù)變得尤為關(guān)鍵。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專為生物制品（如單抗、融合蛋白等）中HCP的富集和去除高豐度蛋白而設(shè)計，利用磁珠法構(gòu)建了一個多樣化且復(fù)雜的親和配體庫，旨在高效地識別并結(jié)合目標(biāo)蛋白。其設(shè)計不僅針對傳統(tǒng)的單一蛋白，還能適用于融合蛋白、單克隆抗體等多種生物樣本類型，展現(xiàn)了較強的適用性和靈活性。

全球快速增長的抗體、蛋白類藥物等生物藥由相應(yīng)工程細(xì)胞生產(chǎn)。生物制品藥物生產(chǎn)過程中的宿主內(nèi)源性蛋白，被稱為宿主細(xì)胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）會隨著不同工藝流程部分殘留在藥物中。宿主細(xì)胞殘留蛋白作為外源蛋白可能會在不同程度上引發(fā)機體的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致過敏反應(yīng)或其它不良反應(yīng)；另外還有一些殘留HCPs具有蛋白酶或脂酶的活性，可能導(dǎo)致蛋白藥物或輔料的降解，進(jìn)而增加藥物產(chǎn)品的質(zhì)量和療效的不穩(wěn)定性?；诖?，對藥物中HCPs的定性與定量檢測就顯得尤為重要。全球各國藥典如美國藥典，歐洲藥典以及中國藥典都對HCPs檢測提出了具體要求和標(biāo)準(zhǔn)。