漢遜酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比

來源： 發(fā)布時間：2025-08-23

畢赤酵母（Pichia pastoris）是第二代酵母表達系統(tǒng)中的代表性菌株，是美國FDA認定的GRAS（Generally Recognized As Safe）微生物，具有表達水平高，產(chǎn)物活性好，培養(yǎng)成本低，易擴大為工業(yè)化生產(chǎn)等特點。在生物制藥領域，酶制劑、胰島素、表皮生長因子、膠原蛋白等多種生物制劑已經(jīng)通過畢赤酵母系統(tǒng)進行商業(yè)化生產(chǎn)。與其他產(chǎn)品雜質(zhì)一樣，畢赤酵母宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性和有效性產(chǎn)生不利影響，因此在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等過程中需要對其進行定量研究并進行嚴格控制。SHENTEK®畢赤酵母HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）是湖州申科生物自主研發(fā)、具有完全自主知識產(chǎn)權的、實現(xiàn)關鍵試劑全國產(chǎn)化的畢赤酵母HCP通用檢測試劑盒。本試劑盒適用于基于GS115、X33等在內(nèi)的畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白的定量檢測，操作步驟少、快速，檢測專一性強，性能穩(wěn)定可靠。
為確保HCP ELISA檢測產(chǎn)品符合申報要求，湖州申科在試劑盒的全流程開發(fā)方案嚴格按照法規(guī)要求。漢遜酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比

漢遜酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

目前通過Vero細胞培養(yǎng)的病毒有狂犬病病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等，種類繁多，工藝也各有千秋。湖州申科生物Vero細胞裂解型HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）針對工藝過程中Vero細胞裂解后產(chǎn)生的大量不同種類的HCPs，可定量檢測使用Vero細胞系生產(chǎn)并通過細胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細胞蛋白的殘留檢測，抗體與校準品可覆蓋近3000種蛋白。試劑盒操作簡便，提高實驗人員的時間利用率。試劑盒抗體覆蓋率為65.1%-85.1%（IMBS-2D）和76.9%(IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。試劑盒嚴格遵循ISO13485質(zhì)量體系進行生產(chǎn)，并按照法規(guī)要求進行了性能驗證，各項性能滿足Vero宿主細胞蛋白檢測需求。
廣東重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證抗體覆蓋率是 HCP 檢測關鍵指標，影響結(jié)果可信度，需通過方法驗證。

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在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法中， ELISA方法是廣泛應用的，并作為QC日常放行檢測的主要手段。ELISA方法相對簡單、精度良好，方便設定控制范圍和建立技術規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)和過程控制；但ELISA方法檢測依靠抗原抗體特異性結(jié)合，因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關重要。無論是商品化ELISA試劑盒，還是自制的多克隆抗體，如果抗體的特異性和適用性不夠高，都有可能帶來HCPs漏檢的風險，從而對生物制品質(zhì)量安全帶來風險。除此之外，ELISA檢測HCPs使用多克隆抗體，無法針對性的提供高風險HCPs殘留蛋白真實存在情況。

HEK 293細胞來源于人胚腎細胞，廣泛應用于細胞與基因治療領域，如病毒載體的生產(chǎn)等。盡管生物制品會經(jīng)過一系列純化工藝以去除相關雜質(zhì)，但殘留的微量宿主細胞蛋白（HCP）仍會引發(fā)機體的免疫應答，影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。因此，需要對生產(chǎn)工藝中殘留的HEK 293 HCP進行定量檢測，使其符合放行標準。湖州申科生物HEK 293 HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）適用于HEK 293和HEK 293T來源的生物制品（重組蛋白類、細胞和基因治療類等）中宿主細胞蛋白的定量檢測。試劑盒檢測步驟少，快速，專一性強，性能穩(wěn)定可靠。
平臺型試劑盒適用于相近工藝產(chǎn)品線，可適用監(jiān)測不同產(chǎn)品 HCP 水平。

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對宿主細胞蛋白殘留的監(jiān)測是生物藥物生產(chǎn)中一個至關重要的質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute, CQA），它要求在藥物的開發(fā)和生產(chǎn)階段對HCP的存在進行嚴格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的目標蛋白純度逐漸提高，相應地，HCP的含量在持續(xù)降低。這使得在富含目標蛋白，如單抗、融合蛋白等下游工藝樣品在對HCP進行分析和監(jiān)測就變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，高效的HCP富集材料和技術變得尤為關鍵。SHENTEK®AbunProteoX是一種基于磁珠構(gòu)建的親和配體，可高效識別并結(jié)合目標蛋白。利用磁性納米顆粒的獨特性質(zhì)，能夠快速且有效地捕獲HCP，顯著提高檢測靈敏度。此外，親和配體的普遍適用性使得AbunProteoX在處理多種生物樣本時都能表現(xiàn)出色，確保了在樣品中存在高濃度目標蛋白時對低濃度HCP進行質(zhì)譜、電泳等檢測分析的準確性和可靠性。 湖州申科搭建高分辨蛋白質(zhì)譜技術平臺，結(jié)合IMBS技術，推出了IMBS-MS抗體覆蓋率評估方法。宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測定制化開發(fā)

宿主細胞蛋白殘留檢測試劑盒的開發(fā)不是一個簡單的過程，是一個對平臺、技術均有很高要求的整體流程。漢遜酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比

美國藥典USP通則<1132.1> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry（質(zhì)譜法測定生物藥中殘留宿主細胞蛋白）主要介紹了LC-MS技術在宿主細胞殘留蛋白檢測中的應用，從樣品制備、質(zhì)譜測試條件的建立、數(shù)據(jù)的分析、質(zhì)譜方法驗證等多個方面，詳細闡述了質(zhì)譜技術在HCPs中應用的優(yōu)勢與注意事項。作為一種先進的分析技術平臺，質(zhì)譜技術在HCPs分析中的應用，以及與ELISA方法和其他分析方法結(jié)合使用，有助于生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品的整個生命周期中更好地理解和建立HCPs的檢測方法，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定。
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