成都宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

來源： 發(fā)布時間：2025-08-18

按照美國藥典1132章節(jié)的要求，HCPs校準品需滿足代表性要求，即能覆蓋實際工藝產(chǎn)品生產(chǎn)中的HCPs。從HCP免疫檢測方法使用目的和預期風險管理要求考慮，滿足工藝開發(fā)和驗證，同時為了應對下游工藝中潛在的異常工藝失效，或工藝變更需求，建議采用上游發(fā)酵工藝末端，如澄清處理后工藝點的樣本作為HCPs的來源。在實際制備中，可采用空細胞或空載細胞在模擬實際工藝的預定條件進行采集，通過二維電泳或高分辨率質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學方法進行模擬工藝和實際工藝下HCPs的代表性表征分析。越靠近下游HCPs蛋白種類越少，也越接近DS中HCPs，但是其可能無法滿足工藝開發(fā)和驗證需求，也無法保證工藝的潛在風險，往往不推薦使用，或只作為上游工藝HCPs免疫檢測法的輔助使用。
HCP抗體能識別工藝中存在的HCP，避免有占優(yōu)勢的抗體聚集，尤其關注潛在的高風險性HCP的識別能力。成都宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

成都宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

對宿主細胞蛋白殘留的監(jiān)測是生物藥物生產(chǎn)中一個至關重要的質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute, CQA），它要求在藥物的開發(fā)和生產(chǎn)階段對HCP的存在進行嚴格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的目標蛋白純度逐漸提高，相應地，HCP的含量在持續(xù)降低。這使得在富含目標蛋白，如單抗、融合蛋白等下游工藝樣品在對HCP進行分析和監(jiān)測就變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，高效的HCP富集材料和技術變得尤為關鍵。SHENTEK®AbunProteoX是一種基于磁珠構(gòu)建的親和配體，可高效識別并結(jié)合目標蛋白。利用磁性納米顆粒的獨特性質(zhì)，能夠快速且有效地捕獲HCP，顯著提高檢測靈敏度。此外，親和配體的普遍適用性使得AbunProteoX在處理多種生物樣本時都能表現(xiàn)出色，確保了在樣品中存在高濃度目標蛋白時對低濃度HCP進行質(zhì)譜、電泳等檢測分析的準確性和可靠性。 浙江單抗藥物用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證樣品與抗體的匹配程度對宿主細胞蛋白殘留檢測的結(jié)果影響很大。

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對于HCP抗體的純化方法，目前美國藥典1132章節(jié)推薦有兩種方式，包括protein A或protein G親和柱層析法和HCP抗原親和柱層析法。兩種方法各有優(yōu)缺點，均符合監(jiān)管的要求。在實際使用過程中，這對不同產(chǎn)品可能會導致檢測結(jié)果的差異。兩者方法得到的抗體主要區(qū)別是HCP抗體有效含量的占比。HCP抗原親和柱層析法顯然占比高，但是也存在某些HCP抗體丟失的情況，這也會導致針對某些樣本的檢測結(jié)果比前者偏低，需要企業(yè)在實際方法建立時進行充分的評估。HCP抗原親和柱層析法對純化工藝要求更高，為保證抗體批間一致性，需要重點考察HCP抗原柱制備工藝、柱子的使用壽命、再制備的一致性等問題。

大腸桿菌具有遺傳性狀清晰，易于培養(yǎng)和控制，表達水平高，成本低，周期短等特點，是優(yōu)先的經(jīng)濟實惠的蛋白表達系統(tǒng)，K-12系列和B系列菌株是工業(yè)規(guī)模上常用于生物工程的E.coli細菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大量生產(chǎn)質(zhì)粒DNA并進一步制備細胞基因治療產(chǎn)品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株，如BL21，更適用于高效轉(zhuǎn)染表達載體和常規(guī)蛋白的表達，如：病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物針對這兩種菌株的特點，分別開發(fā)了E.coli表達菌HCP殘留檢測試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
工藝特異型試劑盒針對特定生產(chǎn)流程，準確監(jiān)控HCP殘留，適配工藝變動。

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宿主細胞蛋白（HCPs）是生物制品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的關鍵工藝相關雜質(zhì)之一，可導致患者不良的免疫反應、超敏反應，另外也存在導致產(chǎn)品蛋白的降解等問題，影響產(chǎn)品的安全性和有效性，是一項關鍵質(zhì)控指標。HCPs殘留檢測應用常用的方法是ELISA法，操作簡單、靈敏度高，通量較高，是HCPs殘留檢測的日常放行檢方法，各國藥典規(guī)定了用酶聯(lián)免疫法進行HCPs殘留檢測。然而，ELISA 方法檢測HCP殘留仍面臨諸多挑戰(zhàn)。在實際的工藝生產(chǎn)過程中，宿主來源、生產(chǎn)工藝、純化方式、生產(chǎn)規(guī)模等因素均可能對HCPs的種類及復雜性產(chǎn)生影響。
在生物制品質(zhì)控領域需要基于產(chǎn)品特性與風險分析，聚焦關鍵質(zhì)控點開發(fā)宿主蛋白殘留檢測方法。廣東釀酒酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

生物制品臨床申報需提交 HCP 抗體覆蓋率數(shù)據(jù)，否則可能面臨監(jiān)管發(fā)補要求。成都宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一是樣品質(zhì)量。HCP檢測貫穿生物制品生產(chǎn)的全過程，涉及收獲、純化、制備等多個步驟。在不同樣品基質(zhì)下，HCP檢測可能存在巨大差異。例如，對于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對HCP項目進行檢測，因此一般在吸附工藝之前的原液階段進行檢測。此外樣品的收集、處理和保存方式對檢測結(jié)果至關重要。不正確的處理可能導致蛋白降解或變性，從而影響檢測結(jié)果。例如，若采用歷史批樣品作為內(nèi)部質(zhì)控品，應結(jié)合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)合理制定保存條件及保存期限，以保證檢測方法的準確性和穩(wěn)定性。
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