磷酸化蛋白的WB第三方檢測(cè)在實(shí)操過(guò)程中有哪些注意事項(xiàng)？研究完某一蛋白的磷酸化情況后比較好也要研究一下該蛋白總的表達(dá)量。如壓完 phospho-p38 抗體后，我會(huì)把相同的 membrane 做 strip 后再壓 p38, 然后再 strip 一次，再壓內(nèi)標(biāo) actin 。做磷酸化蛋白 WB 時(shí)，除了目標(biāo)蛋白的 band 以外，往往會(huì)出現(xiàn)非特異性的 band. 磷酸化抗體不好的話，甚至?xí)撼龇翘禺愋缘?band, 而沒(méi)有你想要的 band, 所以壓片以后，一定要根據(jù) markers 比對(duì)一下，壓出的 band 分子量是否正確。 磷酸化蛋白 WB 時(shí) backgroud 也往往較深，所以壓片時(shí)間要適當(dāng)，不能太長(zhǎng)或過(guò)短，太長(zhǎng)則 backgroud 太深蓋住想要的那條 band, 時(shí)間過(guò)短則可能沒(méi)有 band 或者 band 太淺。磷酸化蛋白 WB 時(shí)，要用TBST，不能用PBST。用 TBST 洗時(shí)也要注意一下，搖床的轉(zhuǎn)速不要太快，洗的時(shí)間不要太長(zhǎng)，孵育一抗和二抗之后分別洗 5min 3 次即可，寧愿 background 深一些，總比做不出來(lái)強(qiáng)得多 . 另外，洗的時(shí)候，比較好不要把幾張 membrane 疊在一起洗。瑞普信生物技術(shù)有限公司第三方檢測(cè)QPCR實(shí)驗(yàn)靠譜嗎？瀘州HE第三方檢測(cè)中心
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