如何獲取高質(zhì)量的細(xì)胞懸液,下面就帶您一步步***從組織到細(xì)胞懸液的旅程,讓細(xì)胞懸液制備不再成為困擾您的難題。
樣本準(zhǔn)備
新鮮組織樣本是制備細(xì)胞懸液的首要條件,新鮮組織從***取下后,去除周圍的脂肪、結(jié)締組織或者壞死組織,用預(yù)冷的PBS或者生理鹽水沖洗干凈,快速轉(zhuǎn)移到解離實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)胞懸液制備,一般1個(gè)黃豆大小的組織量(200 mg)即可滿足一次組織解離。如果收集到新鮮樣本后無法立即進(jìn)行懸液制備,可暫時(shí)用組織保存液4℃保存,盡快完成細(xì)胞懸液制備。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀如何選擇?浙江現(xiàn)代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)目表
細(xì)胞離心下來的離心速率應(yīng)為多少?
細(xì)胞傳代或凍存時(shí)欲回收細(xì)胞,其離心速度一般為800-1000 rpm/min,室溫離心5-8分鐘,轉(zhuǎn)速過高,將造成細(xì)胞破裂死亡。
如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞?
用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200~2000 個(gè)/毫升,在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?;罴?xì)胞排斥臺(tái)盼蘭,因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞,注意計(jì)數(shù)需在加入臺(tái)盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的,可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行。 四川新型細(xì)胞計(jì)數(shù)儀細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的使用難度。
細(xì)胞內(nèi)有空泡,是否是正?,F(xiàn)象?
部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐藥株等),這個(gè)是正?,F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡,則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳,可以通過調(diào)整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時(shí)間等方法來調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡,且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多,則可能細(xì)胞代次較高,細(xì)胞老化所致,需更換代次較早的細(xì)胞。
細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度,對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞,傳代太稀;或者生長較快的細(xì)胞,傳代較密,細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長)。
經(jīng)典的細(xì)胞計(jì)數(shù)原理:臺(tái)盼藍(lán)
臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),細(xì)胞不被染色;而死細(xì)胞的胞膜不完整,通透性增加,可使臺(tái)盼藍(lán)滲入將細(xì)胞染成藍(lán)色。因此,借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以簡單、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。
細(xì)胞損傷或死亡時(shí),臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜使其變色,活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻(終濃度0.04%) 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀存在什么缺點(diǎn)?
給大家分享一下細(xì)胞手工計(jì)數(shù)的基本原理和需要注意的幾點(diǎn)操作細(xì)節(jié)。
血球計(jì)數(shù)板結(jié)構(gòu)細(xì)胞手工計(jì)數(shù)板主要是血球計(jì)數(shù)板,市面上賣的一般都是有醫(yī)療器械號(hào)(國產(chǎn)進(jìn)口均可用,不用挑哈)。血球計(jì)數(shù)板是一塊比普通載玻片厚的長方形玻片,在中部1/3面積區(qū)域有4條凹槽,將中部區(qū)域分為3個(gè)長方形平臺(tái);其中正中間的平臺(tái)又被一短橫凹槽分隔為兩半,作為兩個(gè)計(jì)數(shù)池,兩個(gè)計(jì)數(shù)池平臺(tái)高度比兩邊略低0.1mm。
在顯微鏡下,每一個(gè)計(jì)數(shù)池均可以看見以下網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),9個(gè)同面積的大方格組成方格網(wǎng),大方格作為計(jì)數(shù)室(綠色和藍(lán)色方框區(qū)域)。計(jì)數(shù)室邊長為1mm,蓋上蓋玻片后容積為:1mm(長)x1mm(寬)x0.1mm(高)=0.1mm3,即一個(gè)計(jì)數(shù)室的體積為0.1mm3,也就是1x10-4mL。我們只要把這個(gè)計(jì)數(shù)室里面的細(xì)胞數(shù)清楚,再乘以104,我們就可以得到每毫升樣本中的細(xì)胞個(gè)數(shù)。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀選擇哪個(gè)品牌?特殊細(xì)胞計(jì)數(shù)儀哪家便宜
細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的原理是什么?浙江現(xiàn)代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)目表
細(xì)胞計(jì)數(shù)有多重要?這個(gè)答案想必不用回答,大家都心里有數(shù)。畢竟我們都曾經(jīng)歷過,花了一整天的時(shí)間制備細(xì)胞、染色、分選,進(jìn)行一個(gè)精密計(jì)劃的實(shí)驗(yàn),結(jié)果卻因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)細(xì)胞量卻不夠而被迫結(jié)束。如今圈子里常用的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法是顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板,然而隔壁實(shí)驗(yàn)室的小明都在用自動(dòng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀了。但一些只相信所見即所得的小伙伴,對(duì)于自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)仍舊不太信任,因此體貼如我就為大家比對(duì)一下自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和血球計(jì)數(shù)板。希望大家能有一個(gè)直觀的印象。浙江現(xiàn)代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)目表
上海拓開生物科技有限公司一直專注于從事生物科技領(lǐng)域、化工科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓,辦公用品、儀器儀表、化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、易制毒化學(xué)品)批發(fā)零售。 【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng)】,是一家電子元器件的企業(yè),擁有自己**的技術(shù)體系。公司目前擁有專業(yè)的技術(shù)員工,為員工提供廣闊的發(fā)展平臺(tái)與成長空間,為客戶提供高質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù),深受員工與客戶好評(píng)。公司以誠信為本,業(yè)務(wù)領(lǐng)域涵蓋葡萄糖乳酸分析儀,生化分析儀,智能控制系統(tǒng),細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,我們本著對(duì)客戶負(fù)責(zé),對(duì)員工負(fù)責(zé),更是對(duì)公司發(fā)展負(fù)責(zé)的態(tài)度,爭取做到讓每位客戶滿意。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了良好的葡萄糖乳酸分析儀,生化分析儀,智能控制系統(tǒng),細(xì)胞計(jì)數(shù)儀形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。