臨床研究人群，如果一種基因zhiliao產(chǎn)品具有引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，需要開展長期隨訪觀察時(shí)，所有接受基因zhiliao產(chǎn)品的受試者在簽署知情同意書后均應(yīng)入組長期隨訪臨床研究。在設(shè)計(jì)長期隨訪臨床研究的方案時(shí)，應(yīng)考慮目標(biāo)受試者人群及特征、整體健康情況以及接受zhiliao的患者的預(yù)期生存期等特征對(duì)遲發(fā)性不良反應(yīng)的收集的影響。通常來說，當(dāng)臨床研究人群的某些特征（如預(yù)期壽命短、多重合并癥、以及暴露于放療或化療等其他藥物）可能干擾遲發(fā)性不良反應(yīng)的觀察分析時(shí)，會(huì)影響長期隨訪觀察在評(píng)估和減輕受試者風(fēng)險(xiǎn)方面的效用；而在病情較輕或較局限，合并癥以及伴隨zhiliao有限或較穩(wěn)定的受試者中，通過長期隨訪觀察...

堿基編輯器：CBE：胞嘧啶堿基編輯器(Cytosine base editor，CBE)，依賴于胞嘧啶核苷脫氨基酶，通過將胞嘧啶核苷脫氨轉(zhuǎn)換為尿嘧啶核苷，尿嘧啶核苷在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會(huì)轉(zhuǎn)換為胸腺嘧啶核苷，從而實(shí)現(xiàn)C到T的轉(zhuǎn)換。已開發(fā)出四代CBE（BE1、BE2、BE3和BE4），由于BE3引起的脫靶效應(yīng)相對(duì)較少，因此它已在動(dòng)物（小鼠）、細(xì)菌和植物細(xì)胞中廣用于編輯細(xì)胞的基因組成。腺嘌呤堿基編輯器(Adenine base editor，ABE)，依賴于腺嘌呤核苷脫氨基酶，通過將腺嘌呤核苷脫氨轉(zhuǎn)換為次黃苷，然后在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會(huì)轉(zhuǎn)換為鳥嘌呤核苷，從而實(shí)現(xiàn)腺嘌呤(A)到鳥嘌呤(G)的轉(zhuǎn)...

如果基因zhiliao產(chǎn)品通過全身給xingfang式遞送，長期隨訪中的安全性監(jiān)測不僅包括靶qiguan或靶組織的脫靶活性，而且還應(yīng)包括可能發(fā)生在其他組織和qiguan中的脫靶活性?；蚪M整合性或者脫靶活性的分析通常需采用有創(chuàng)性12檢測方法取得樣本，實(shí)施時(shí)還需要考慮技術(shù)和倫理上的可行性，例如靶向視網(wǎng)膜或肝臟等組織的基因zhiliao產(chǎn)品，可能難以對(duì)靶細(xì)胞采樣，這種情況下可能需要通過密切的臨床隨訪等方式間接評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)，選擇易于采樣的替代細(xì)胞也可能提供關(guān)于相關(guān)信息，例如靶向骨髓造血干細(xì)胞的基因zhiliao產(chǎn)品，可以通過采集外周血細(xì)胞或富集外周血干細(xì)胞進(jìn)行觀察。脫靶檢測評(píng)估，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)...

R-loop seq雖然不是一種真正意義上的脫靶位點(diǎn)檢測方法，但能為堿基編輯脫氨酶的脫靶提供一種度量方法，以便于之后的脫氨酶點(diǎn)突變優(yōu)化，來降低脫靶的發(fā)生幾率。2) Detect-seqCRISPR衍生技術(shù)由于其復(fù)雜性，檢測其脫靶位點(diǎn)的hexin思路是捕獲實(shí)驗(yàn)過程中的關(guān)鍵中間產(chǎn)物或者終產(chǎn)物。這種設(shè)計(jì)思路下，目前較為成功的是檢測堿基編輯CBE脫靶位點(diǎn)的Detect-seq[13]。CBE的原理是將dC脫氨變?yōu)閐U，迫使其對(duì)側(cè)的dG變?yōu)閐A，較終將堿基對(duì)從C-G轉(zhuǎn)變?yōu)門-A。Detect-seq便是針對(duì)中間態(tài)的dU，使用Uracil DNA Glycosylase (UDG)，去除U堿基后，替換為帶...

采用基因編輯技術(shù)制備的細(xì)胞產(chǎn)品。對(duì)于采用基因編輯技術(shù)制備的基因修飾細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行體外在靶和脫靶活性評(píng)估，以確認(rèn)修飾酶或向?qū)NA對(duì)靶基因序列的特異性。在評(píng)估基因編輯的脫靶風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)說明所選擇的評(píng)價(jià)策略的合理性和敏感性。雖然采用計(jì)算機(jī)分析預(yù)測基因編輯的潛在脫靶位點(diǎn)，并對(duì)潛在脫靶位點(diǎn)進(jìn)行深度測序分析，可用于評(píng)估基因編輯的脫靶風(fēng)險(xiǎn)；但選擇的評(píng)價(jià)策略仍應(yīng)包含體外全基因組測序比對(duì)，以證明潛在脫靶位點(diǎn)未出現(xiàn)脫靶。此外，在評(píng)估脫靶活性時(shí)，還應(yīng)評(píng)估種屬特異性的差異、細(xì)胞病理生理狀態(tài)的差異或細(xì)胞類型的差異對(duì)非臨床數(shù)據(jù)預(yù)測性的影響。必要時(shí)，還應(yīng)分析基因編輯對(duì)細(xì)胞表型和生理功能的潛在影響。crispr脫靶檢測，推...

gRNA的長度和錯(cuò)配： 17個(gè)核苷酸長度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類細(xì)胞中減少潛在脫靶效應(yīng)的指導(dǎo)方針：1) 應(yīng)避免在PAM的7-10 bp范圍內(nèi)靶序列有超過3個(gè)錯(cuò)配；2) 在PAM的12 bp內(nèi)，應(yīng)避免sgRNA 凸起以減少脫靶效應(yīng)。gRNA的化學(xué)修飾：在gRNA核糖磷酸骨架中加入2?-O-甲基-3?-膦?；宜狨?huì)導(dǎo)致位點(diǎn)特異性修飾，使脫靶切割減少40-120倍，同時(shí)保持靶向性能。gRNA上游5'發(fā)夾結(jié)構(gòu)的修飾可以提高Cas9和Cas12的特異性，降低脫靶效應(yīng)。脫靶檢測技術(shù)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測效...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補(bǔ)定位到靶位點(diǎn)，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點(diǎn)引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險(xiǎn)。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學(xué)術(shù)界通用的基因編輯技術(shù)，也徹底改變了我們的生物學(xué)研究方法。為提高CRISPR技術(shù)的安全性，特別是往臨床應(yīng)用發(fā)展時(shí)的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點(diǎn)的編輯效率和準(zhǔn)確性，同時(shí)降低脫靶位點(diǎn)編輯發(fā)生概率為目標(biāo)，來優(yōu)化CRISPR技術(shù)。另一方面，研究者們也開發(fā)了大量檢測方法，用于檢測CRISPR的靶向風(fēng)險(xiǎn)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)，用于早期sgRNA序列...

CIRCLE-Seq，將gDNA打斷并環(huán)化，環(huán)化的DNA與CRISPR/RNP孵育，NGS測序檢測線性化的DNapian段，確定脫靶位點(diǎn)。PCR富集后測序，成本相對(duì)較低，能檢測低頻脫靶突變。安必奇sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估，安必奇生物提供sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估服務(wù)，幫助您挑選高度特異，脫靶率低的sgRNA進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，我們也協(xié)助您檢測分析基因編輯后細(xì)胞樣品的脫靶情況，通過各種高通量測序檢測技術(shù)，我們能準(zhǔn)確的分析全基因組范圍內(nèi)的脫靶位點(diǎn)，推動(dòng)CRISPR/Cas9技術(shù)在zhiliao藥物開發(fā)和臨床研究中的應(yīng)用。我們的優(yōu)勢：靈敏度高：能檢測低頻脫靶突變★準(zhǔn)確性高：檢測結(jié)果可通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證★多種檢測...

但是由于CHIP-seq實(shí)驗(yàn)本身的難度較高，DISCOVER-seq這類方法的接受度并不高。3. 其他特殊方法CRISPR技術(shù)經(jīng)過這么多年的發(fā)展，其應(yīng)用已經(jīng)不局限于造成DNA雙鏈斷裂，一些不要切割DNA雙鏈的CRISPR衍生技術(shù)（如堿基編輯、先導(dǎo)編輯和CRISPRi/a），可以在不引發(fā)隨機(jī)突變的情況下，對(duì)基因組進(jìn)行精細(xì)編輯或者調(diào)控。這些技術(shù)所使用nCas9或dCas9只結(jié)合或者切割雙鏈中的一條鏈，之前的脫靶檢測方法都不能直接適用。這些CRISPR衍生技術(shù)中，CRISPR產(chǎn)生的脫靶可以被細(xì)分為兩個(gè)部分，其一是Cas9/sgRNA結(jié)合DNA導(dǎo)致的脫靶，這部分信息使用同樣序列的sgRNA進(jìn)行野生型C...

2022年2月下旬，在醫(yī)麥客舉辦的年度盛會(huì)——“蓄力前行，助航新生——2021 CSGCT基因與細(xì)胞zhiliao醫(yī)學(xué)峰會(huì)”期間，唯可生物創(chuàng)始人兼CEO-吳寧博士分享了唯可生物在基因zhiliao賽道針對(duì)安全性展開的技術(shù)服務(wù)，讓在場行業(yè)大咖和觀眾真正領(lǐng)會(huì)到ISA(integration site analysis，整合位點(diǎn)插入分析)領(lǐng)域國際金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)的優(yōu)勢，以及基因編輯定量脫靶檢測、載體拷貝數(shù)檢測、載體質(zhì)量控制等多項(xiàng)檢測技術(shù)的行業(yè)意義。吳寧博士畢業(yè)于德國海德堡大學(xué)，德國國家aizheng研究中心(DKFZ)，并于2021年3月同幾位合伙人聯(lián)合創(chuàng)立了上海唯可生物科技有限公司。其創(chuàng)始團(tuán)隊(duì)擁有的檢測...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補(bǔ)定位到靶位點(diǎn)，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點(diǎn)引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險(xiǎn)。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學(xué)術(shù)界通用的基因編輯技術(shù)，也徹底改變了我們的生物學(xué)研究方法。為提高CRISPR技術(shù)的安全性，特別是往臨床應(yīng)用發(fā)展時(shí)的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點(diǎn)的編輯效率和準(zhǔn)確性，同時(shí)降低脫靶位點(diǎn)編輯發(fā)生概率為目標(biāo)，來優(yōu)化CRISPR技術(shù)。另一方面，研究者們也開發(fā)了大量檢測方法，用于檢測CRISPR的靶向風(fēng)險(xiǎn)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)，用于早期sgRNA序列...

細(xì)胞經(jīng)基因修飾后會(huì)改變其生物學(xué)特性，同時(shí)也會(huì)帶來新的安全性風(fēng)險(xiǎn)，如基因編輯脫靶風(fēng)險(xiǎn)、載體插入突變風(fēng)險(xiǎn)、載體重組風(fēng)險(xiǎn)、表達(dá)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的風(fēng)險(xiǎn)等。在制定非臨床研究計(jì)劃時(shí)，除參考《細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》（試行）中的對(duì)細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品的一般要求外，還應(yīng)具體問題具體分析，基于產(chǎn)品特點(diǎn)和目前已有的科學(xué)認(rèn)知，結(jié)合擬定適應(yīng)癥、患者人群、給藥途徑和給yaofang案等方面的考慮，科學(xué)合理的設(shè)計(jì)和實(shí)施非臨床研究，充分表征產(chǎn)品的藥理學(xué)、毒理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特征。在進(jìn)行獲益風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，還應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注由非臨床向臨床過渡時(shí)非臨床研究的局限性和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測的不確定性。脫靶檢測安全性評(píng)價(jià)，推薦唯可生...

CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌和古細(xì)菌在不斷進(jìn)化的過程中產(chǎn)生的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，它應(yīng)用CRISPR RNA（crRNA）以堿基互補(bǔ)的形式引導(dǎo)相應(yīng)的Cas蛋白識(shí)別入侵的外源基因組，并對(duì)其DNA進(jìn)行剪切，用以保護(hù)自身的基因組免受外源核酸如噬菌體、病毒等的干擾和破壞。經(jīng)過人為改造后，可在真核細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高度靈活且特異的基因組編輯，通過設(shè)計(jì)特異性向?qū)NA(Single guide RNA, sgRNA)序列與靶序列進(jìn)行堿基配對(duì)，從而引導(dǎo)Cas蛋白結(jié)合到靶序列處，行使DNA切割功能，然后利用細(xì)胞的非同源性末端連接(Non-homologous end joining, NHEJ)或同源重組(Homol...

脫靶來自于這些技術(shù)所攜帶的功能基團(tuán)，如堿基編輯的脫氨酶和先導(dǎo)編輯的逆轉(zhuǎn)錄酶，不依賴sgRNA結(jié)合基因組DNA的情況下產(chǎn)生的脫靶。為檢測第二類脫靶現(xiàn)象，研究者需要針對(duì)每種技術(shù)設(shè)計(jì)專門的檢測方法。1) R-loop seq在堿基編輯開發(fā)早期，雖然靶位點(diǎn)的編輯效率很高，但研究者也很快發(fā)現(xiàn)脫氨酶會(huì)在游離的時(shí)候隨機(jī)修飾暴露的DNA單鏈，導(dǎo)致大量的脫靶位點(diǎn)。為降低這類脫靶現(xiàn)象的發(fā)生，研究者設(shè)計(jì)了R-loop seq，以dSaCas9結(jié)合DNA形成R-loop，暴露出DNA單鏈，為堿基編輯的脫氨酶提供一個(gè)固定的脫靶位點(diǎn)，然后以該位點(diǎn)的編輯效率反映堿基編輯脫氨酶的脫靶程度。選擇潛在的脫靶位點(diǎn)，例如選擇gRNA...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補(bǔ)定位到靶位點(diǎn)，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點(diǎn)引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險(xiǎn)。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學(xué)術(shù)界通用的基因編輯技術(shù)，也徹底改變了我們的生物學(xué)研究方法。為提高CRISPR技術(shù)的安全性，特別是往臨床應(yīng)用發(fā)展時(shí)的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點(diǎn)的編輯效率和準(zhǔn)確性，同時(shí)降低脫靶位點(diǎn)編輯發(fā)生概率為目標(biāo)，來優(yōu)化CRISPR技術(shù)。另一方面，研究者們也開發(fā)了大量檢測方法，用于檢測CRISPR的靶向風(fēng)險(xiǎn)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)，用于早期sgRNA序列...

插入突變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，這可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。影響插入突變的關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點(diǎn)的偏好性；（2）載體的設(shè)計(jì)，如增強(qiáng)子、啟動(dòng)子等構(gòu)建元件的活性，影響鄰近基因的潛力；產(chǎn)生剪接突變體的潛在剪接位點(diǎn)或多聚腺苷酸信號(hào)等；（3）細(xì)胞載體拷貝數(shù)；4）轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的功能活性（如與細(xì)胞生長調(diào)控相關(guān)）和表達(dá)水平；5）靶細(xì)胞群的轉(zhuǎn)化可能性，這可能與細(xì)胞的分化狀態(tài)、增殖潛力、體外培養(yǎng)條件和體內(nèi)植入環(huán)境等有關(guān)。如何檢測是否發(fā)生脫靶? 基因編輯的脫靶率檢測一般有兩種方...

長期表達(dá)。與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細(xì)胞或基因修飾細(xì)胞中持續(xù)存在并編碼表達(dá)作用因子（功能性蛋白或基因表達(dá)調(diào)節(jié)元件），并通過長久或長期改變靶細(xì)胞或組織的功能來達(dá)到zhiliao效果。同時(shí)，由于基因zhiliao編碼的作用因子在體內(nèi)的長期暴露或表達(dá)異常，可能產(chǎn)生與其功能相關(guān)的長期安全性風(fēng)險(xiǎn)，如細(xì)胞生長失控和惡性liu形成、自身免疫反應(yīng)或其他無法預(yù)測的遲發(fā)性不良反應(yīng)。潛伏再jihuo。部分病毒類基因zhiliao產(chǎn)品可能存在從潛伏期被再jihuo的可能性或者引起機(jī)體中已有病毒ganran的再jihuo，存在ganran相關(guān)的遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。脫靶檢測評(píng)估，...

插入突變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，這可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。影響插入突變的關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點(diǎn)的偏好性；（2）載體的設(shè)計(jì)，如增強(qiáng)子、啟動(dòng)子等構(gòu)建元件的活性，影響鄰近基因的潛力；產(chǎn)生剪接突變體的潛在剪接位點(diǎn)或多聚腺苷酸信號(hào)等；（3）細(xì)胞載體拷貝數(shù)；4）轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的功能活性（如與細(xì)胞生長調(diào)控相關(guān)）和表達(dá)水平；5）靶細(xì)胞群的轉(zhuǎn)化可能性，這可能與細(xì)胞的分化狀態(tài)、增殖潛力、體外培養(yǎng)條件和體內(nèi)植入環(huán)境等有關(guān)。脫靶檢測簡單有效的方法之一是全基因組測序法。浙江種子脫靶...

gRNA的長度和錯(cuò)配： 17個(gè)核苷酸長度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類細(xì)胞中減少潛在脫靶效應(yīng)的指導(dǎo)方針：1) 應(yīng)避免在PAM的7-10 bp范圍內(nèi)靶序列有超過3個(gè)錯(cuò)配；2) 在PAM的12 bp內(nèi)，應(yīng)避免sgRNA 凸起以減少脫靶效應(yīng)。gRNA的化學(xué)修飾：在gRNA核糖磷酸骨架中加入2?-O-甲基-3?-膦?；宜狨?huì)導(dǎo)致位點(diǎn)特異性修飾，使脫靶切割減少40-120倍，同時(shí)保持靶向性能。gRNA上游5'發(fā)夾結(jié)構(gòu)的修飾可以提高Cas9和Cas12的特異性，降低脫靶效應(yīng)。挑選前面的潛在脫靶位點(diǎn)，通過PCR測序驗(yàn)證是否脫靶。浙江...

TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過評(píng)估TCR與人體自身抗原肽的交叉識(shí)別能力來評(píng)估。首先，應(yīng)采用體外試驗(yàn)測定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）復(fù)合物的親和力，并說明抗原肽的選擇依據(jù)及選擇范圍。此外，還應(yīng)研究其他相關(guān)或不相關(guān)的蛋白中是否含有靶抗原肽序列。如果TCR與人自身抗原肽有交叉反應(yīng)可能，應(yīng)確定靶抗原肽的較小識(shí)別基序（motif），并采用計(jì)算機(jī)預(yù)測分析評(píng)估交叉反應(yīng)性。如果計(jì)算機(jī)預(yù)測可識(shí)別出具有潛在交叉反應(yīng)性的抗原肽，應(yīng)在體外測定TCR修飾免疫細(xì)胞對(duì)表達(dá)相應(yīng)蛋白或遞呈相應(yīng)抗原肽的的細(xì)胞的識(shí)別能力。如果不能排除交叉反應(yīng)性，應(yīng)基于含有潛在交叉反應(yīng)性抗原肽...

TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過評(píng)估TCR與人體自身抗原肽的交叉識(shí)別能力來評(píng)估。首先，應(yīng)采用體外試驗(yàn)測定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）復(fù)合物的親和力，并說明抗原肽的選擇依據(jù)及選擇范圍。此外，還應(yīng)研究其他相關(guān)或不相關(guān)的蛋白中是否含有靶抗原肽序列。如果TCR與人自身抗原肽有交叉反應(yīng)可能，應(yīng)確定靶抗原肽的較小識(shí)別基序（motif），并采用計(jì)算機(jī)預(yù)測分析評(píng)估交叉反應(yīng)性。如果計(jì)算機(jī)預(yù)測可識(shí)別出具有潛在交叉反應(yīng)性的抗原肽，應(yīng)在體外測定TCR修飾免疫細(xì)胞對(duì)表達(dá)相應(yīng)蛋白或遞呈相應(yīng)抗原肽的的細(xì)胞的識(shí)別能力。如果不能排除交叉反應(yīng)性，應(yīng)基于含有潛在交叉反應(yīng)性抗原肽...

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮。關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長、是否存在優(yōu)勢克隆、克隆性生長是否導(dǎo)致惡性liu等）。如果基因組整合相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的分析可行，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：?在接受基因zhiliao產(chǎn)品的較初5年內(nèi)，兩次檢測間的采樣間隔建議不超過6個(gè)月。此后每年至少檢測一次，直至檢測數(shù)...

堿基編輯器：CBE：胞嘧啶堿基編輯器(Cytosine base editor，CBE)，依賴于胞嘧啶核苷脫氨基酶，通過將胞嘧啶核苷脫氨轉(zhuǎn)換為尿嘧啶核苷，尿嘧啶核苷在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會(huì)轉(zhuǎn)換為胸腺嘧啶核苷，從而實(shí)現(xiàn)C到T的轉(zhuǎn)換。已開發(fā)出四代CBE（BE1、BE2、BE3和BE4），由于BE3引起的脫靶效應(yīng)相對(duì)較少，因此它已在動(dòng)物（小鼠）、細(xì)菌和植物細(xì)胞中廣用于編輯細(xì)胞的基因組成。腺嘌呤堿基編輯器(Adenine base editor，ABE)，依賴于腺嘌呤核苷脫氨基酶，通過將腺嘌呤核苷脫氨轉(zhuǎn)換為次黃苷，然后在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會(huì)轉(zhuǎn)換為鳥嘌呤核苷，從而實(shí)現(xiàn)腺嘌呤(A)到鳥嘌呤(G)的轉(zhuǎn)...

長期隨訪的觀察時(shí)間長期隨訪的持續(xù)時(shí)間應(yīng)確保足以觀察到受試者因產(chǎn)品特性、暴露情況（生物分布和給藥途徑）等導(dǎo)致的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)不短于遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期發(fā)生時(shí)間。一般而言，針對(duì)不同類型的基因zhiliao產(chǎn)品建議如下：?具有基因組整合活性的載體（例如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體）和轉(zhuǎn)座子元件建議觀察不短于15年。?可以產(chǎn)生持續(xù)ganran、或有潛伏再jihuo風(fēng)險(xiǎn)的細(xì)菌或病毒載體（如單純皰疹病毒）建議觀察15年或至數(shù)據(jù)表明不再存在任何風(fēng)險(xiǎn)（ganran或再jihuo）?；蚓庉嫯a(chǎn)品建議觀察15年或至數(shù)據(jù)表明不再存在任何風(fēng)險(xiǎn)。?腺相關(guān)病毒載體建議觀察5年或至數(shù)據(jù)表明不再存在任何風(fēng)險(xiǎn)。如何檢測是否發(fā)生脫靶? ...

對(duì)基于慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的基因zhiliao產(chǎn)品，如出現(xiàn)與可復(fù)制xingbing毒可能相關(guān)的不良事件，還應(yīng)開展可復(fù)制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的檢測。關(guān)于基因編輯產(chǎn)品的特殊考慮基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性，或利用在靶活性來預(yù)測脫靶活性的水平。如果基因zhiliao產(chǎn)品通過全身給yaofang式遞送，長期隨訪中的安全性監(jiān)測不僅包括靶qiguan或靶組織的脫靶活性，而且還應(yīng)包括可能發(fā)...

對(duì)于基因修飾細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，充分的非臨床研究是為了：（1）闡明基因修飾的目的、功能以及產(chǎn)品的作用機(jī)制，明確其在擬定患者人群中使用的生物學(xué)合理性；（2）為臨床試驗(yàn)的給藥途徑、給藥程序、給藥劑量的選擇提供支持性依據(jù)；（3）根據(jù)潛在風(fēng)險(xiǎn)因素，闡明毒性反應(yīng)特征，預(yù)測人體可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)，確定不良反應(yīng)的臨床監(jiān)測指標(biāo)，為制定臨床風(fēng)險(xiǎn)控制措施提供參考依據(jù)。因此，應(yīng)充分開展非臨床研究，收集用于風(fēng)險(xiǎn)獲益評(píng)估的信息，以確立擬開發(fā)產(chǎn)品在目標(biāo)患者人群中預(yù)期具有合理的、可接受的獲益風(fēng)險(xiǎn)比，同時(shí)為臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)和風(fēng)險(xiǎn)控制策略的制定提供支持性依據(jù)。檢測脫靶效應(yīng)比較好的方法:CIRCLE-seq。浙江高精度脫靶檢測...

Cas9蛋白是一種切割外來DNA的酶，像一把分子剪刀。該蛋白通常與兩個(gè)RNA分子結(jié)合：crRNA和另一個(gè)稱為tracrRNA（或“反式j(luò)ihuocrRNA”）。這兩個(gè)RNA分子引導(dǎo)Cas9到它將進(jìn)行切割的目標(biāo)部位。這段DNA是與crRNA的20個(gè)核苷酸互補(bǔ)的。CRISPR技術(shù)是從細(xì)菌和古細(xì)菌的自然防御機(jī)制中改編而來的。這些生物體使用CRISPR衍生的RNA和各種Cas蛋白，包括Cas9，來阻止病毒和其他異物的攻擊。它們主要通過切碎和破壞外來入侵者的DNA來做到這一點(diǎn)。當(dāng)這些組件被轉(zhuǎn)移到其他更復(fù)雜的生物體中時(shí)，它允許對(duì)基因進(jìn)行操縱，或“編輯”。脫靶檢測評(píng)估，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢...

CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌和古細(xì)菌在不斷進(jìn)化的過程中產(chǎn)生的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，它應(yīng)用CRISPR RNA（crRNA）以堿基互補(bǔ)的形式引導(dǎo)相應(yīng)的Cas蛋白識(shí)別入侵的外源基因組，并對(duì)其DNA進(jìn)行剪切，用以保護(hù)自身的基因組免受外源核酸如噬菌體、病毒等的干擾和破壞。經(jīng)過人為改造后，可在真核細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高度靈活且特異的基因組編輯，通過設(shè)計(jì)特異性向?qū)NA(Single guide RNA, sgRNA)序列與靶序列進(jìn)行堿基配對(duì)，從而引導(dǎo)Cas蛋白結(jié)合到靶序列處，行使DNA切割功能，然后利用細(xì)胞的非同源性末端連接(Non-homologous end joining, NHEJ)或同源重組(Homol...

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來源的細(xì)胞產(chǎn)品。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（inducedpluripotentstemcell，iPS）自身具有致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，在體內(nèi)可形成畸胎瘤，整合病毒載體的使用和誘導(dǎo)多能性可能增加iPS細(xì)胞插入致突變性和致性的風(fēng)險(xiǎn)。因此，應(yīng)在shou次臨床試驗(yàn)前完成致瘤性試驗(yàn)。若設(shè)計(jì)科學(xué)合理，能夠滿足評(píng)價(jià)要求，也可在持續(xù)時(shí)間足夠長的毒性研究中評(píng)估致瘤性風(fēng)險(xiǎn)。體內(nèi)致瘤性試驗(yàn)建議采用摻入未分化iPS細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)品作為陽性對(duì)照，以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的靈敏度。如果iPS細(xì)胞設(shè)計(jì)了機(jī)制以降低致瘤風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)中確認(rèn)/驗(yàn)證此類機(jī)制的功能 脫靶檢測簡單有效的方法之一是全基因組測序法。常州種子基因脫靶檢測報(bào)告堿基編輯...

由于設(shè)計(jì)的sgRNA會(huì)與非靶點(diǎn)DNA序列錯(cuò)配，引入非預(yù)期的基因突變，即脫靶效應(yīng)(Off-targeteffects)。脫靶效應(yīng)造成了研究中的許多不確定性，這無疑限制了該技術(shù)的應(yīng)用。因此，研究者希望能開發(fā)有效的方法來檢測脫靶效應(yīng)。在目前主流的脫靶效應(yīng)評(píng)估方法中，有一種方法為GUIDE-seq，其原理是利用一種短的雙鏈寡聚核苷酸（dsODN）標(biāo)記CRISPR/Cas誘導(dǎo)的脫靶斷裂，然后對(duì)標(biāo)簽所在的基因組區(qū)域進(jìn)行高通量測序，通過生物信息學(xué)分析從而確定脫靶位點(diǎn)。利用該技術(shù)可以在基因組范圍內(nèi)檢測CRISPR脫靶效應(yīng)，從而改變了以往先預(yù)測假定脫靶位點(diǎn)再檢測的思路；與其他的評(píng)估方法相比，GUIDE-seq更...