體外轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子。研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力。體外轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細胞毒性越強。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的。然而，一些改進使PEI在應(yīng)用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙?；?，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團，可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。inhibtor轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨RNA 轉(zhuǎn)染試劑是一類能夠?qū)?RNA 分子導入細胞內(nèi)的物質(zhì)作用原理。

納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。通過將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來修飾納米粒子，有助于改善它們在細胞內(nèi)的運輸。將納米顆粒靶向到細胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過磁轉(zhuǎn)染來實現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)染試劑相比，使用納米顆粒轉(zhuǎn)染具有相當?shù)男屎透偷募毎拘裕孕枰C明以這種方式傳遞DNA會導致體內(nèi)相似水平的基因表達，特別是考慮到該技術(shù)可能導致副作用。

魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機制主要包括以下幾個方面：一、保護RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復合，形成穩(wěn)定的復合物，從而保護RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強細胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護RNA，還能增強RNA的穿透細胞的能力。魚精蛋白-RNA復合物的形成具有雙重功能，一方面保護RNA不被降解，另一方面增強其穿透進入細胞的能力23。這種增強的細胞穿透性可能是由于魚精蛋白的陽離子性質(zhì)，使其能夠與細胞膜相互作用，促進RNA的進入細胞2。影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。

三、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2細胞的轉(zhuǎn)染中，血清在本實驗室條件下并不影響轉(zhuǎn)染效率19。細胞傳代次數(shù)：Caco-2細胞在2-5次細胞傳代時轉(zhuǎn)染效率比較高9。綜上所述，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對不同類型細胞的影響存在多方面的差異，包括轉(zhuǎn)染效率、影響因素以及脂質(zhì)體組成等。在進行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗時，需要根據(jù)不同的細胞類型優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，以獲得比較好的轉(zhuǎn)染效果。為了在體外和體內(nèi)可重復地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。廣東轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染

流式細胞術(shù)可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉(zhuǎn)染效率。體外轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染

為了在體外和體內(nèi)可重復地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩(wěn)定，還會改變生物分布或促進體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過程中，在***和組織的細胞外基質(zhì)中，以及**終進入靶細胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設(shè)計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)。體外轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染