北京配制好的細(xì)胞凍存液使用說(shuō)明

根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)皿的大小加入適量細(xì)胞培養(yǎng)基后進(jìn)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。保存條件：4℃保存，有效期一年。若長(zhǎng)不用可凍存于-20℃，有效期三年。

產(chǎn)品質(zhì)量：無(wú)血清細(xì)胞凍存液經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的內(nèi)，滲透壓，pH檢測(cè)，并經(jīng)過(guò)0.1um濾膜過(guò)濾，確保產(chǎn)品不含有細(xì)菌，支原體等污染。

注意事項(xiàng)：1.請(qǐng)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行凍存，由于DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的損傷，凍存細(xì)胞分裝后應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱，減少在室溫存放時(shí)間。如遇特殊情況，可先短暫放置于4℃并盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。 “細(xì)胞凍存液的細(xì)胞存活率和活力高，批次性差異小.北京配制好的細(xì)胞凍存液使用說(shuō)明

細(xì)胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)；4.離心1000rpm，5min；5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml；6.將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。廣州完全培養(yǎng)基和細(xì)胞凍存液需要4度預(yù)冷細(xì)胞凍存液除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液.

細(xì)胞凍存常用凍存液的成分如下：

20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過(guò)濾后分裝保存?zhèn)溆谩?

注意事項(xiàng)：

1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過(guò)濾除菌。

2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。

3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。

DMSO在凍存液中的作用： DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過(guò)細(xì)胞膜，降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點(diǎn)下降，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。

凍存液儲(chǔ)存時(shí)間一般比較短，不能滿足時(shí)間跨度大的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的需求。且這樣人力和時(shí)間成本大，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)了不穩(wěn)定性。

無(wú)血清即用型凍存液順應(yīng)科技發(fā)展應(yīng)運(yùn)而生，西寶生物經(jīng)銷多種日本進(jìn)口wako品牌、適合不同細(xì)胞的無(wú)血清細(xì)胞凍存液，可以滿足多層次的實(shí)驗(yàn)需求，并給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)簡(jiǎn)便、可靠、高效的新體驗(yàn)，品種齊全，質(zhì)量保證。BAMBANKER® 無(wú)血清細(xì)胞凍存液：BAMBANKER是一種日本原裝進(jìn)口含DMSO的無(wú)血清細(xì)胞凍存液，均無(wú)不明動(dòng)物源成分，高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為實(shí)驗(yàn)效果帶來(lái)保證。不需要進(jìn)行程序降溫，可在-80℃長(zhǎng)期保存細(xì)胞（**細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞）。 細(xì)胞凍存液在細(xì)胞建株和建系中，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則：

慢凍速融，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。 細(xì)胞凍存液可以放多久?怎么配制細(xì)胞凍存液怎么樣

細(xì)胞凍存液具體有哪些?北京配制好的細(xì)胞凍存液使用說(shuō)明

細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過(guò)程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開(kāi)***開(kāi)始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中，溫度達(dá)-196℃，理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。北京配制好的細(xì)胞凍存液使用說(shuō)明

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