CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。6、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。CCK-8用途：***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗.上海cck8的r平方
細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結合流式的雙標準來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞，設置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實驗組中，每孔加入細胞懸液100ul上海cck8的r平方用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。
二、優(yōu)點：·使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度；·CCK-8法的重復性優(yōu)于MTT法，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。
當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1000 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
注意事項CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。當在培養(yǎng)箱內培養(yǎng)時，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。 主要是重復性優(yōu)于MTT；
沒有做過MTT實驗，但其實原理及目的都是一樣的（反應機理不一樣）。都說CCK8簡單點而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個試劑盒。CCK8的說明書大家一定要認真閱讀，里面很多細節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關于各種細胞的種板數(shù)都很有參考價值，因為那是反復驗證過的比較好數(shù)值。但無論如何，做這個試驗一定要摸條件。你就算再懶，這個懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細胞毒性試驗為前提，如果你做的是促進細胞生長的***的藥效實驗那就另當別論了。那它的用途也就大致可以猜到，和細胞增殖、細胞毒性相關的實驗都可以。上海cck8的r平方
該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等。上海cck8的r平方
貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細胞已經貼壁完全，而且這樣設置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了，細胞呆在孔里幾天不換液結果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題：假設我要孔內是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內呢。關于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。上海cck8的r平方
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