LNCap細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代嚴(yán)格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行，與pBabe-hygro-SSeCKs（1.5ug）和pEGFP-N3（1:1，共1.0微克）共轉(zhuǎn)染（6孔板中每孔的量），并用LipoD293?試劑（左圖）和FugeneHD（右圖）分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光，以此來評價(jià)轉(zhuǎn)染效率。在血清和***的存在下，HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達(dá)到95%的細(xì)胞融合。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率。無論有無血清、***存在均可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率。polviet轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介：X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑，溶于80%乙醇中，經(jīng)0.2μm濾膜過濾，然后封裝于玻璃小瓶中，適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。優(yōu)勢：1.具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高，生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡便、節(jié)省時(shí)間，只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡單稀釋，再與質(zhì)粒DNA共同孵育，即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對于常用細(xì)胞無需進(jìn)行費(fèi)時(shí)費(fèi)力的優(yōu)化工作。Opti-MEM轉(zhuǎn)染試劑分裝驚艷登場!臨床級(jí)載體生產(chǎn)必備轉(zhuǎn)染試劑。
產(chǎn)生慢***的比較
通過 LipoD293? 試劑（升級(jí)版）和 Lipofectamine LTX（LTX）試劑將三個(gè) cDNAs 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293T 細(xì)胞。一個(gè) GFP 載體，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細(xì)胞，其次是分別添加不同量的慢定都上清液，1 微升（上圖）和 10 微升（下圖）。
5 天后，細(xì)胞通過流式細(xì)胞儀檢測。右上角的數(shù)字表明轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的百分比來測定慢***的滴度。由 LipoD293? and LTX 產(chǎn)生的慢***的滴度被量化，分為是 8x10^6 和 3x10^6 tu/ml 。
美國Polysciences公司是一家成立于1961年，致力于特殊技精細(xì)化學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，單/多聚體等產(chǎn)品的研發(fā)供應(yīng)，所提供的產(chǎn)品服務(wù)于組織學(xué)（顯微技術(shù)）、生物技術(shù)、電子技術(shù)、護(hù)理及制藥工程等多個(gè)領(lǐng)域。起初為電子顯微鏡提供納米級(jí)樣本制備方案，幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。隨后，開拓了在病理（組織研究）應(yīng)用產(chǎn)品，使組織除了石蠟包埋外，還能夠包埋在塑料塊中；開發(fā)染料和染色劑，以實(shí)現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與****合作，開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家**中心合作，開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品，并用于紫杉醇的初步臨床試驗(yàn)。繼而開發(fā)出超順磁珠，用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。轉(zhuǎn)染后6h觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細(xì)胞，用PBS洗滌3次以上，以備RNA抽提。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室中**常規(guī)的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法：生物轉(zhuǎn)染，物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用***等微生物作為基因?qū)胼d體，以慢***、腺***和腺相關(guān)***等**常見，其侵染效率可以達(dá)到90%以上，但常因安全性等問題，很多實(shí)驗(yàn)室對其敬而遠(yuǎn)之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因***，無論哪一種都需要特定的設(shè)備，且一分錢一分貨，性能好的價(jià)格也都很性感電轉(zhuǎn)化化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中**常用的轉(zhuǎn)染方法，主要包括兩類：陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學(xué)分子與帶有負(fù)電荷的核酸通過正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實(shí)現(xiàn)靶向敲低。慢病毒轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)
每孔培養(yǎng)體積均為100μL，細(xì)胞數(shù)目在105左右。polviet轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)
.在多種不同類型細(xì)胞中基因敲除效率超過90%。
2.高靈活應(yīng)用， 同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實(shí)驗(yàn)。
3.細(xì)胞毒性低，結(jié)果相關(guān)性好，確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過程本身介導(dǎo)。
4.兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。
圖4. X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4種細(xì)胞系的HPRT基因沉默實(shí)驗(yàn)。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程，或標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法，將100nM HPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細(xì)胞。 通過LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的熒光定量法評估基因沉默效率。結(jié)果顯示用羅氏這款試劑在四種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。 polviet轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)