一直都像個(gè)新手，從未老道過(guò)。所有新手的迷茫與無(wú)奈我**能體會(huì)。看到園子里有一些同學(xué)在問(wèn)有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情，當(dāng)初我也和他們一樣，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語(yǔ)。希望我寫(xiě)的這些非專(zhuān)業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒(méi)有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智，我寫(xiě)的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰。**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì)，買(mǎi)CCK-8都是一整箱，一整箱的買(mǎi)。上海同仁化學(xué)研究所 cck8
、***濃度的確定需要做一個(gè)時(shí)間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個(gè)實(shí)驗(yàn)組改成各個(gè)作用時(shí)間就可以了。至于說(shuō)***濃度的確定，網(wǎng)上有很多確認(rèn)方法，個(gè)人建議以IC50值作為***濃度即可。計(jì)算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。
MTT作用之后，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內(nèi)的紫色結(jié)晶吸走。有條件的實(shí)驗(yàn)室，這一步可以采用離心機(jī)將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒(méi)有這種類(lèi)型的離心機(jī)，可以在測(cè)量吸光度的時(shí)候，將酶聯(lián)免疫的機(jī)器震蕩時(shí)間調(diào)制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 天津cck8 數(shù)據(jù)要求用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值.
氧化還原試劑對(duì)CCK8測(cè)定的影響：CCK8是一個(gè)氧化還原反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，在整個(gè)操作當(dāng)中，如果有氧化還原試劑都會(huì)影響**終的結(jié)果。當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK8的測(cè)定，增加OD值。在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)***測(cè)定反應(yīng)的發(fā)生，減少OD值。在高中化學(xué)我們就知道金屬是氧化還原反應(yīng)中的重要參與者。各個(gè)公司都會(huì)告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會(huì)*****?！蔽?*開(kāi)始看到這句話時(shí)很懵，因?yàn)椴恢涝诓僮髦性鯓訒?huì)遇到這種情況。下面就分享我能想到或者在操作中真實(shí)遇到的。
讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的吸光度。
***率（％）= [（對(duì)照孔吸光度-實(shí)驗(yàn)孔吸光度）/（對(duì)照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50
注意事項(xiàng)
CCK8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng)，如果實(shí)驗(yàn)處理?xiàng)l件中存在還原劑的影響，應(yīng)事先去除。如果實(shí)驗(yàn)條件中存在還原物質(zhì)，需單獨(dú)測(cè)定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計(jì)；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測(cè)。 cck8試劑盒價(jià)格是多少?
。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10 mM的話，將會(huì)*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好.天津cck8 od值統(tǒng)計(jì)方法
若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.上海同仁化學(xué)研究所 cck8
二、優(yōu)點(diǎn)：·使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；·CCK-8法能快速檢測(cè)；·CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；·CCK-8法的重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT法，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來(lái)的誤差；·CCK-8法對(duì)細(xì)胞毒性小，可以多次測(cè)定選取比較好測(cè)定時(shí)間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開(kāi)即用。上海同仁化學(xué)研究所 cck8