培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外，血清不影響測(cè)定，所以我用CCK-8來(lái)測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn)，說(shuō)實(shí)話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞.北京cck8 od值大于2
CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的注意事項(xiàng)：1.加入CCK8溶液時(shí)不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)；2.要設(shè)計(jì)空白對(duì)照組；3.對(duì)于大多數(shù)情況，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶標(biāo)儀之前要提前開啟10min預(yù)熱；5.若連續(xù)多天檢測(cè)，必須保持所有條件一致。相關(guān)鏈接：CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區(qū)別CCK8空白對(duì)照，測(cè)定參比波長(zhǎng)的設(shè)定以及OD值的合適范圍CCK8標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)時(shí)間、終止反應(yīng)以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細(xì)菌/培養(yǎng)基/培養(yǎng)板)對(duì)CCK8測(cè)定的影響細(xì)胞因素(預(yù)培養(yǎng)/生長(zhǎng)方式/狀態(tài)/細(xì)胞數(shù)/死細(xì)胞)對(duì)CCK8測(cè)定的影響細(xì)胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?天津mtt法和cck8的區(qū)別CCK-8 反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)定。
培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外，血清不影響測(cè)定。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí)，多加了這個(gè)***劑的濃度，
CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見說(shuō)明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。***篩選：在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí)，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8。
特點(diǎn)不同1、CellCountingKit-8：靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好；操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力；水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞；無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對(duì)細(xì)胞毒性低；適合于高通量***篩選。2、MTT法：特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。三、應(yīng)用不同1、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn)。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗*****篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測(cè)定等。所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。湖北cck8生長(zhǎng)曲線細(xì)胞數(shù)
換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生。北京cck8 od值大于2
CCK8，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2、MTT法：其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。北京cck8 od值大于2