牛血清知識大分享其實提到血清很多人都對他一知半解,聽起來很熟悉,但是了解不深入。其實血清主要功能是提供基本營養(yǎng)物質,保護細胞,提供各種生長因子,所以對于人體的健康,血清也是不可或缺的一部分。用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等,如造血干細胞分化培養(yǎng),馬血清是必加成分之一。選擇用牛血清培養(yǎng)細胞的原因主要是來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。上海進口胎牛血清供應
細胞增殖間期
S期DNA合成期
從G1末期到S初期、細胞內迅速形成DNA聚合酶及四種脫氧核苷酸。S期主要特點是利用G1期準備的物質條件完成DNA復制,并合成一定數量的組蛋白,供DNA形成染色體初級結構。在S期末,細胞核DNA含量增加一倍,為細胞進行分裂作了準備。DNA復制一旦受到障礙或發(fā)生錯誤,就會阻擋細胞的分裂或引起變異,導致異常細胞或畸形的發(fā)生。S期持續(xù)時間大約7~8小時。G2期DNA合成后期
這一時期的主要特點是為細胞分裂準備物質條件。DNA合成終止,但RNA和蛋白質合成又復旺盛,主要是組蛋白、微管蛋白、膜蛋白等的合成,為紡錘體和新細胞膜等的形成備足原料。若阻斷這些合成,細胞便不能進入有絲分裂。G2期歷時較短而恒定,哺乳動物細胞一般為1~1.5小時。
上海雞血清公司南美特級胎牛血適合細胞株的保藏及組織***培養(yǎng)、單抗研制、絕大多數**細胞.
何謂熱滅活一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和***。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示,經過正確處理的熱滅***清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會***的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是"小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅***清。
抗體稀釋參考
一抗稀釋范圍為1mg/mL原液1:1000-1:5000或0.2-1.0μg/mL,二抗稀釋范圍為1mg/mL原液1:2000-1:10000或10-50ng/mL
注意事項
為獲得比較好效果,在孵育步驟請使用搖床;
2. 將Tween20(終濃度0.05-0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號;
3. 不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑,疊氨鈉是HRP的***物;
4. 避免手與膜直接接觸,實驗過程應戴手套或使用干凈的鑷子;
5. 所有設備必須清潔且不沾染外來物質,金屬器械(如剪刀)不得具有可見的銹跡,銹跡可能導致斑點形成和高背景。 血清的種類以及方法。
有研究人員通過不同年齡段的牛血清在不同濃度下對SP2/0細胞株培養(yǎng)效果的比較試驗,用較大增殖濃度、倍增時間、克隆率等指標來推斷樣品血清的采血年齡段,其結果如下:SP2/0細胞株為鼠骨髓瘤細胞。首先,研究人員在無菌條件下,將7個供試血清μm過濾除菌,然后將供試血清按10%、8%、6%、4%、2%的濃度分別加到MEM培養(yǎng)基稀釋好的細胞懸液中使細胞濃度為1×104/ml。充分混勻后在96孔細胞培養(yǎng)板中每孔接種,每個試驗樣接種8孔。每24h記數一孔,共記數7d。研究人員又將供試血清按8%的血清濃度加到MEM培養(yǎng)基稀釋好的細胞懸液中,將SP2/0細胞稀釋到5個/mL,分別接種到96孔細胞培養(yǎng)板中,每孔,每個供試血清樣品接種48孔。馬血清本產品無支原體、無噬菌體,低內***,**終過濾孔徑0.1um。南通fbs血清產品
關于無血清細胞凍存液的操作規(guī)范是什么?上海進口胎牛血清供應
t細胞增殖試驗又稱T細胞轉化試驗。T細胞在體外經某種物質刺激,細胞代謝和形態(tài)相繼變化,在24~48h細胞內蛋白質和核酸的合成增加,產生一系列增殖的變化,如細胞變化、細胞漿擴大、出現空泡、核仁明顯、核染色質疏松等,由淋巴細胞轉變?yōu)榱馨湍讣毎R虼?,這種淋巴細胞增殖又叫淋巴細胞轉化。據此可判斷出淋巴細胞對有關刺激的反應性與功能狀態(tài)。  (1)非抗原性刺激物:如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陸(PWM)、脂多糖(LPS),通稱促有絲分裂原。其中LPS刺激B細胞,PWM可刺激T和B細胞,PHA和ConA刺激T細胞增殖。  (2)抗原性刺激物:如結核菌素、葡萄球菌*、破傷風類、鏈球菌激酶、抗原、同種異型抗原等。上海進口胎牛血清供應