血清的保存應(yīng)該注意以下幾點:(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物較好增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體參與反應(yīng)有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化.(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.所制備的免疫血清與人紅細胞內(nèi)醛縮酶無交叉反應(yīng)。杭州血清進口
血清提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質(zhì).
●提供***和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)***(氫化可的松、)、類固醇***(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等.
●提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。
●提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷.
西安bi血清直銷血清產(chǎn)品的技術(shù)難點。
總RNA提取試劑盒
Trizol是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍較大,可以從動物單位、 植物材料、 各種微生物及培養(yǎng)細胞等樣品中提取總RNA。 該方法對少量的單位(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的單位(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在Trizol中被充分裂解的同時能夠比較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機相,RNA 分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實驗,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、體外翻譯等。
Trizol 試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。(注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。)
血清保存方法應(yīng)保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
***:血清的成份可能有幾百種之多,對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、***和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難;
第二:血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制;
第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì),這被認為是“瓶中惡化”的原因之
無血清快速細胞凍存液使用方法?
t細胞增殖試驗又稱T細胞轉(zhuǎn)化試驗。T細胞在體外經(jīng)某種物質(zhì)刺激,細胞代謝和形態(tài)相繼變化,在24~48h細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的合成增加,產(chǎn)生一系列增殖的變化,如細胞變化、細胞漿擴大、出現(xiàn)空泡、核仁明顯、核染色質(zhì)疏松等,由淋巴細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨湍讣毎?。因此,這種淋巴細胞增殖又叫淋巴細胞轉(zhuǎn)化。據(jù)此可判斷出淋巴細胞對有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài)。  (1)非抗原性刺激物:如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陸(PWM)、脂多糖(LPS),通稱促有絲分裂原。其中LPS刺激B細胞,PWM可刺激T和B細胞,PHA和ConA刺激T細胞增殖。  (2)抗原性刺激物:如結(jié)核菌素、葡萄球菌*、破傷風(fēng)類、鏈球菌激酶、抗原、同種異型抗原等。內(nèi)***含量低;(內(nèi)***:≤3EU/ml).新生小牛血清公司
CHF可導(dǎo)致血清膽固醇酯脂肪酸組成發(fā)生變化。杭州血清進口
細胞增殖周期
細胞各組成部份在不斷發(fā)展變化的基礎(chǔ)上還要不斷增殖,產(chǎn)生新細胞,以代替衰老、死亡和創(chuàng)傷所損失的細胞,這是機體新陳代謝的表現(xiàn),也是機體不斷生長發(fā)育、賴以生存和延續(xù)種族的基礎(chǔ)。
細胞各組成部份在不斷發(fā)展變化的基礎(chǔ)上還要不斷增殖,產(chǎn)生新細胞,以代替衰老、死亡和創(chuàng)傷所損失的細胞,這是機體新陳代謝的表現(xiàn),也是機體不斷生長發(fā)育、賴以生存和延續(xù)種族的基礎(chǔ)。細胞以分裂的方式進行增殖,每次分裂后所產(chǎn)生的新細胞必須經(jīng)過生長增大,才能再分裂。現(xiàn)在把細胞增殖必須經(jīng)過生長到分裂的過程稱為細胞周期。換句話說,細胞增殖周期(或細胞周期)是指細胞從一次分裂結(jié)束開始生長,到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程。細胞增殖周期可分為兩個時期,即間期和分裂期。
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