CCK-8盒子的選購(gòu)還記得***次做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)研究生二年級(jí)的時(shí)候，當(dāng)時(shí)用的***個(gè)盒子是Sigma的，當(dāng)時(shí)的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma。那個(gè)盒子給了我莫大的鼓勵(lì)，因?yàn)樵谀侵白龇肿涌寺∫恢倍疾皇呛茼樌?。這個(gè)盒子是我的碩士老板從美國(guó)帶回來(lái)的，品質(zhì)有保證，***的結(jié)果也是很好的。后面在做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們?cè)谟羞x擇的情況下都會(huì)買sigma，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖。其實(shí)也不貴，只是到貨時(shí)間太慢。MTT與CCK8區(qū)別是什么?上海cck8曲線
CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的注意事項(xiàng)：1.加入CCK8溶液時(shí)不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)；2.要設(shè)計(jì)空白對(duì)照組；3.對(duì)于大多數(shù)情況，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶標(biāo)儀之前要提前開(kāi)啟10min預(yù)熱；5.若連續(xù)多天檢測(cè)，必須保持所有條件一致。相關(guān)鏈接：CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區(qū)別CCK8空白對(duì)照，測(cè)定參比波長(zhǎng)的設(shè)定以及OD值的合適范圍CCK8標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)時(shí)間、終止反應(yīng)以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細(xì)菌/培養(yǎng)基/培養(yǎng)板)對(duì)CCK8測(cè)定的影響細(xì)胞因素(預(yù)培養(yǎng)/生長(zhǎng)方式/狀態(tài)/細(xì)胞數(shù)/死細(xì)胞)對(duì)CCK8測(cè)定的影響細(xì)胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?江蘇cck8 缺點(diǎn)水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞.
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及分享：
CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值。但無(wú)論如何，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件。你就算再懶，這個(gè)懶不得，否則你都只是在做無(wú)用功。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提， 如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。
摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間；3、加藥后的孵育時(shí)間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間?？雌饋?lái)很多，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn)。而且都是種的空白板，也就是不加***，只加細(xì)胞和CCK8。
、***濃度的確定需要做一個(gè)時(shí)間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個(gè)實(shí)驗(yàn)組改成各個(gè)作用時(shí)間就可以了。至于說(shuō)***濃度的確定，網(wǎng)上有很多確認(rèn)方法，個(gè)人建議以IC50值作為***濃度即可。計(jì)算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。
MTT作用之后，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內(nèi)的紫色結(jié)晶吸走。有條件的實(shí)驗(yàn)室，這一步可以采用離心機(jī)將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒(méi)有這種類型的離心機(jī)，可以在測(cè)量吸光度的時(shí)候，將酶聯(lián)免疫的機(jī)器震蕩時(shí)間調(diào)制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 CCK8細(xì)胞增值檢測(cè)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介.
CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究，中藥功能及機(jī)理研究，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。各有千秋!CCK8之外的選擇除了MTT,還可以是LDH.天津cck8 同仁
用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值.上海cck8曲線
CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的方法：
1.將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。
2.根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)快慢決定鋪板細(xì)胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well），每組3-5重復(fù)，每孔100-200μl培養(yǎng)基。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量（如需要檢測(cè)5天，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well，5復(fù)孔，200μl培養(yǎng)基，檢測(cè)5天為例，各實(shí)驗(yàn)組需要細(xì)胞數(shù)量為1000×5×5個(gè)細(xì)胞，從計(jì)數(shù)好的細(xì)胞懸液中取出所需的細(xì)胞量和完全培養(yǎng)基混勻，**終體積為200×5×5μl。 上海cck8曲線