哈爾濱Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容：1.蛋白質(zhì)鑒定：可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合相關(guān)技術(shù)，利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)進行鑒定研究。2.翻譯后修飾：很多mRNA表達產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化，糖基化，酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式，因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。3.蛋白質(zhì)功能確定：如分析酶活性和確定酶底物，細胞因子的生物分析/配基-受體結(jié)合分析?？梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對蛋白質(zhì)表達出來后在細胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。有的熒光蛋白表達系統(tǒng)就是研究蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)定位的一個很好的工具。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有生物質(zhì)譜。哈爾濱Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)

常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)：Labelfree多肽組學(xué)：顧名思義，就是不使用任何標(biāo)記方法，直接對肽段進行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析。實驗流程簡單，只需要對蛋白進行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機。定量方式分為兩種：峰面積（Peakintensity）和峰計數(shù)（Spectralcount），常用的是峰面積。不過，由于質(zhì)譜采集時只選取topN的母離子進行二級碎裂和MS2檢測，所以會丟失一些豐度較低的肽段信息，缺失值比較多。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白組學(xué)：TMT全稱是TandemMassTag，是經(jīng)典化學(xué)標(biāo)記試劑，普遍用于差異表達蛋白質(zhì)組分析研究中。該技術(shù)采用6重、10重或16重同位素標(biāo)簽，與肽段的氨基發(fā)生共價結(jié)合反應(yīng)，可實現(xiàn)同時對6個/10個/16個不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。（目前16標(biāo)鹿明生物可提供技術(shù)服務(wù)）。浙江定量蛋白組學(xué)應(yīng)用蛋白質(zhì)組研究是對基因組研究的重要補充。

iTRAQ/TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)優(yōu)勢：1、結(jié)果可靠：基于高靈敏度和高分辨的串聯(lián)質(zhì)譜方法，定性與定量同步進行，同時得出定性和定量結(jié)果，重復(fù)樣品間的蛋白表達量相關(guān)性高；2、靈敏度高：分級分離，降低樣品復(fù)雜度，相比凝膠電泳觀測到的蛋白變化在2倍以上，iTRAQ計算出的蛋白變化在1.3-1.6倍之間，可檢測低豐度蛋白；3、分離能力強：可分離出酸/堿性蛋白，小于10KDa或大于200KDa的蛋白、難溶性蛋白等；4、自動化程度高：液質(zhì)聯(lián)用，自動化操作，分析速度快，分離效果好。

蛋白質(zhì)組學(xué)：質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)組學(xué)的基本原理主要是通過測定被測樣品離子的理化性質(zhì)來進行分析，根據(jù)樣品的質(zhì)量譜圖和相關(guān)信息從而得到定性和定量結(jié)果。目前，蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析一般是根據(jù)保留時間（retentiontime）、質(zhì)荷比（m/z）、離子強度（intensity）這三個維度對肽蛋白質(zhì)進行鑒定和定量，即3D蛋白質(zhì)組學(xué)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)在3D蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)之上增加了第四維度，離子淌度（mobility），主要根據(jù)離子的形狀和截面對離子進行分離，能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段，使低豐度蛋白信號能夠被區(qū)分和識別出來。4D蛋白質(zhì)組學(xué)基于timsTOFPro質(zhì)譜儀，結(jié)合PASEF（ParallelAccumulationSerialFragmentation，同步累積連續(xù)碎裂）與TIMS（TrappedIonMobilitySpectrometry，離子遷移譜），可重復(fù)測量所有檢測離子的碰撞截面（CCS），能更快、更靈敏的進行蛋白質(zhì)組定性和定量。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關(guān)研究和日常工作。

LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù))：在非標(biāo)記策略的定量模型中，主要涉及兩種不同的算法：其一，以肽段的色譜峰積分面積為基礎(chǔ)，通過比較一對生物樣品中相對應(yīng)到蛋白質(zhì)酶解多肽的色譜積分面積而得到兩者的相對豐度；其二，以肽段被質(zhì)譜檢測的計數(shù)為基礎(chǔ)，通過歸一化來表征被檢測蛋白質(zhì)的相對豐度。非標(biāo)記技術(shù)認為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率（Counts）與其在混合物中的豐度成正相關(guān)，因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度，通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來，從而對蛋白質(zhì)進行定量。蛋白質(zhì)組（Proteome）一詞，源于蛋白質(zhì)（protein）與基因組（genome）兩個詞的組合。杭州醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)費用

蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。哈爾濱Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)

非標(biāo)定量法(Label-free)是通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度，分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化，認為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān)，因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度，通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質(zhì)進行定量。按照其原理主要分為兩種，第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法，發(fā)展比較早，已經(jīng)形成多種定量算法，但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ)，各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ)，計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。哈爾濱Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)