細胞融合技術可獲得具有雙親細胞遺傳特性的雜交細胞?;瘜W融合法常用聚乙二醇(PEG),PEG 能改變細胞膜脂質(zhì)分子的排列,在去除 PEG 后,細胞膜恢復原有的有序結(jié)構,促使細胞融合。電融合法是將細胞置于交變電場中,使細胞聚集排列成串,然后施加高壓電脈沖,破壞細胞膜的結(jié)構,導致細胞融合。此外,還有利用滅活病毒介導的生物融合法,如仙臺病毒,病毒表面的糖蛋白可與細胞膜上的受體結(jié)合,使相鄰細胞的細胞膜連接,進而融合。細胞融合技術在單克隆抗體的制備、植物體細胞雜交培育新品種、動物克隆等方面發(fā)揮著關鍵作用。細胞生物學技術服務運用基因轉(zhuǎn)導技術,實現(xiàn)外源基因在細胞中的穩(wěn)定表達。杭州高效干細胞定向誘導分化服務應用
在細胞凋亡研究中,多種技術相輔相成。Annexin V - FITC/PI 雙染法是常用手段,Annexin V 對磷脂酰絲氨酸具有高度親和力,在細胞凋亡早期,磷脂酰絲氨酸從細胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè),Annexin V 與之結(jié)合,而 PI 可穿透死亡細胞的細胞膜,對細胞核進行染色。通過流式細胞儀檢測,可區(qū)分正常細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和壞死細胞。TUNEL 法即脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法,利用 TdT 酶將生物素或地高辛標記的 dUTP 連接到凋亡細胞斷裂 DNA 的 3'-OH 末端,再通過顯色反應,在顯微鏡下觀察凋亡細胞。此外,Caspase 活性檢測也是關鍵,Caspase 家族在細胞凋亡過程中起重心作用,通過特定的熒光底物,檢測 Caspase 的活性變化,可判斷細胞凋亡進程。無錫高效細胞增殖與毒性檢測服務中心科研人員依賴細胞生物學技術服務,開展基因編輯細胞系構建,研究基因功能。
細胞表面受體如同細胞的 “順風耳” 與 “傳聲筒”,掌控著細胞對外界信號的接收與傳遞,相關研究技術致力于解鎖這一通訊密碼。放射性配體結(jié)合測定法,利用放射性標記的配體與細胞表面受體特異性結(jié)合,精確測量受體的數(shù)量、親和力及結(jié)合動力學參數(shù),探究受體功能特性。在神經(jīng)科學研究中,通過該技術研究神經(jīng)遞質(zhì)受體,闡釋神經(jīng)元興奮與抑制的調(diào)控機制,為醫(yī)療神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如癲癇、抑郁癥等提供理論支撐。熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(FRET)實時監(jiān)測受體與配體結(jié)合、激發(fā)后的構象變化,直觀展現(xiàn)細胞信號轉(zhuǎn)導的起始瞬間,揭示細胞通訊的精細過程。
細胞基因編輯技術仿佛神奇的 “基因剪刀”,能夠改寫細胞的遺傳密碼。CRISPR - Cas9 技術是當下較耀眼的明星,它精細定位目標基因,切割 DNA 雙鏈,實現(xiàn)基因敲除、插入或替換。在遺傳疾病醫(yī)療領域,針對鐮刀型細胞貧血癥等單基因遺傳病,將糾正后的正常基因?qū)牖颊咴煅杉毎?,利用基因編輯技術修復突變位點,再回輸體內(nèi),有望從根源上醫(yī)療疾病。在作物育種方面,編輯農(nóng)作物基因,增強抗病蟲害、耐旱澇等優(yōu)良性狀,提高糧食產(chǎn)量,保障全球糧食安全,為人類生活帶來諸多福祉。高校實驗室通過細胞生物學技術服務,開展干細胞分化研究,為再生醫(yī)學奠基。
細胞分泌組承載著細胞間通訊的重要 “語言”,其分析技術日益成熟。利用超濾、超速離心等方法富集細胞培養(yǎng)上清中的分泌蛋白,再結(jié)合高靈敏度的質(zhì)譜分析,可鑒定出成百上千種分泌蛋白及其修飾形式。在免疫調(diào)節(jié)研究中,剖析免疫細胞分泌組,挖掘如白細胞介素、干擾素等關鍵細胞因子,闡釋機體免疫應答啟動與調(diào)控機制。于神經(jīng)科學領域,追蹤神經(jīng)元分泌的神經(jīng)營養(yǎng)因子等,探究神經(jīng)發(fā)育、修復進程。這一技術架起細胞微觀分泌與宏觀生理功能間的橋梁,助力解讀復雜生命活動中的細胞協(xié)作奧秘。細胞生物學技術服務提供細胞外泌體分離與鑒定服務,探索細胞間通訊新途徑。福州簡單細胞增殖與毒性檢測服務中心
細胞生物學技術服務助力免疫細胞研究,解析免疫細胞活化與調(diào)控機制。杭州高效干細胞定向誘導分化服務應用
細胞凋亡檢測對于了解細胞的死亡機制和疾病發(fā)長頭發(fā)展過程至關重要。常見的檢測方法包括 Annexin V - PI 雙染法、TUNEL 法等。技術人員會對處理后的細胞進行染色,通過流式細胞術或熒光顯微鏡觀察細胞凋亡的情況。例如在藥物研發(fā)中,檢測藥物對腫瘤細胞凋亡的誘導作用,判斷藥物的療效和作用機制。他們嚴格按照操作流程進行樣本制備和檢測,準確區(qū)分早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和壞死細胞,為藥物研發(fā)、瘤子學等領域提供關鍵的細胞凋亡數(shù)據(jù),有助于篩選出更有效的醫(yī)療藥物和方案。杭州高效干細胞定向誘導分化服務應用