對于Co-IP實驗初學者，常遇到的“坑”主要有：首先，抗體選擇至關重要。選擇特異性不強或親和力低的抗體，可能導致非特異性結合，干擾實驗結果。因此，選擇經(jīng)過驗證的高質(zhì)量抗體是關鍵。其次，實驗操作規(guī)范不容忽視。細胞裂解不充分、洗滌不當?shù)榷紩绊懙鞍讖秃衔锏募兓?，進而影響實驗結果。初學者應嚴格按照步驟操作，確保每一步都精確無誤。再者，結果解讀需謹慎。初學者可能因經(jīng)驗不足，誤將非特異性結合視為真實相互作用。因此，解讀結果時，需結合其他實驗方法如Western Blot進行驗證。另外，實驗安全不可忽視。遵守實驗室規(guī)章制度，注意個人防護和實驗室衛(wèi)生，是確保實驗順利進行的基礎。綜上所述，初學者在進行Co-IP實驗時，應關注抗體選擇、實驗操作、結果解讀和實驗安全等方面，通過不斷學習和實踐，逐漸積累經(jīng)驗，避免常見錯誤。IP-Mass（免疫沉淀-質(zhì)譜）技術應用場景。新疆免疫共沉淀檢測CoIP-MS
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）實驗是一種生物化學和分子生物學技術，用于檢測和鑒定在細胞內(nèi)發(fā)生蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的復合物。該實驗依賴于抗原-抗體特異性結合的原理，通過特定抗體來捕獲并富集與目標蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)復合物。在免疫共沉淀實驗中，首先需要將細胞或組織在適當?shù)牧呀鈼l件下破碎，釋放出其中的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)中，許多會通過非共價鍵（如氫鍵、疏水作用、離子鍵等）或共價鍵（在某些情況下）相互作用形成復合物。然后，向裂解物中加入針對目標蛋白質(zhì)的特異性抗體，這些抗體會與目標蛋白質(zhì)結合形成抗原-抗體復合物。接下來，利用與抗體結合的親和劑（如ProteinA、ProteinG或特定種類的瓊脂糖珠），通過免疫親和反應將抗原-抗體復合物捕獲并固定在固相支持物上。在經(jīng)過一系列洗滌步驟后，可以去除與固相支持物非特異性結合的蛋白質(zhì)，從而將目標蛋白質(zhì)及其相互作用的蛋白質(zhì)復合物富集在固相支持物上。通過適當?shù)南疵摲椒▽⒏患牡鞍踪|(zhì)復合物從固相支持物上洗脫下來，并進行后續(xù)的分析。山西互作機制CoIPCo-IP技術雖廣泛應用，但受抗體特異性、低豐度蛋白、樣品制備和瞬時互作等限制，需結合其他方法驗證！
Co-IP（免疫共沉淀）技術的基本原理是基于抗原與抗體之間的特異性結合，從而實現(xiàn)對蛋白質(zhì)相互作用的研究。在Co-IP實驗中，研究人員使用特異性抗體與目標蛋白結合，形成抗原-抗體復合物。這個復合物隨后被吸附到固化了蛋白A或G的支持物上，由于這些蛋白具有吸附抗體的能力，因此相應的抗原分子及其相互作用蛋白質(zhì)也被一同吸附。這個過程稱為沉淀。接下來，未被沉淀的蛋白質(zhì)通過緩沖液的流洗被去除，確保只有與目標蛋白特異性結合的蛋白質(zhì)被保留下來。這些被沉淀的蛋白質(zhì)復合物隨后被洗脫下來，并通過特定的檢測方法進行分析，從而證實蛋白質(zhì)之間的相互作用。Co-IP技術為深入研究蛋白質(zhì)相互作用提供了有力工具，有助于揭示蛋白質(zhì)的功能和調(diào)控機制。
Co-IP（免疫共沉淀）和ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）是兩種常用于研究蛋白質(zhì)與DNA或蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的實驗方法。實驗原理方面的區(qū)別：Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結合，將目標蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來，進而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復合物，并通過超聲或酶處理將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過抗原抗體的特異性識別反應沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段。CoIP是研究蛋白質(zhì)與蛋白互作的實驗技術。
Co-IP的優(yōu)點主要體現(xiàn)在以下幾個方面：高特異性：通過使用特異性抗體，Co-IP能夠精確地捕獲目標蛋白及其相互作用伙伴，減少非特異性干擾。靈敏度高：該方法能夠檢測到低豐度的蛋白質(zhì)相互作用，適用于研究微弱或瞬時的蛋白互作。適用于多種樣本類型：無論是細胞裂解液、組織提取物還是純化后的蛋白質(zhì)復合物，Co-IP都能進行有效分析。與質(zhì)譜技術兼容：Co-IP與質(zhì)譜分析相結合，可以鑒定互作蛋白的身份，提供更為詳盡的互作網(wǎng)絡信息。操作相對簡便：Co-IP的實驗流程相對清晰，操作簡便，適用于大多數(shù)實驗室的研究需求。免疫共沉淀是研究蛋白質(zhì)相互作用的方法，可用于確定候選或未知蛋白的相互作用，并可通過WB或質(zhì)譜檢測。廣東相互作用蛋白檢測CoIP聯(lián)合質(zhì)譜檢測
Co-IP和ChIP實驗對象有什么區(qū)別。新疆免疫共沉淀檢測CoIP-MS
CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點：
試驗設計：盡量進行試驗組別設計和進行生物學重復檢測，提高后續(xù)驗證的陽性率。常規(guī)過表達單組（AbIPvsIgGIP）；動態(tài)互作組學（實驗組vs對照組vsIg組）。根據(jù)目的設計適當?shù)纳飳W重復。如果后續(xù)以CoIP-Mass數(shù)據(jù)進行互作組標準分析，則需要3-4組生物學重復；如果后續(xù)以尋找關鍵互作蛋白，進行機制深入研究，則建議1-2次生物學重復。經(jīng)驗顯示單次重復假陽性率90%。
蛋白表達和細胞量：細胞用量要求大(2-10e7細胞量），建議不少于5e7（金標準：320g離心細胞量50μl，保障項目用量）。低表達蛋白，建議使用過表達組進行檢測。蛋白表達可根據(jù)WB結果或初步根據(jù)數(shù)據(jù)庫判定（ProteomicsDB；HumanProteinAtlas）。 新疆免疫共沉淀檢測CoIP-MS