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luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類(lèi)使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱(chēng),雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲(chóng),而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類(lèi)臍菇,Omphalotusoleariu')或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲(chóng)中,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱(chēng)為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲(chóng),含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲(chóng)有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲(chóng)、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng))則有更多,因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)(Photinuspyrali')。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。D-熒光素有時(shí)候也叫游離酸。鎮(zhèn)江熒光素D-熒光素鉀鹽濃度
故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測(cè)樣品中的微生物含量。APT熒光檢測(cè)儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測(cè)。1970年,科學(xué)家***次測(cè)定了螢火蟲(chóng)熒光素酶的結(jié)構(gòu);1985年,科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲(chóng)熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達(dá),從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學(xué)家們測(cè)定了該種螢火蟲(chóng)熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲(chóng)熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中,再注入熒光素,使*細(xì)胞發(fā)光,通過(guò)探測(cè)熒光,就能監(jiān)測(cè)*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理,用這種方法能對(duì)致病基因、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究,對(duì)某些疾病進(jìn)行診斷,監(jiān)測(cè)疫苗、藥物和治療方法的效力。揚(yáng)州體外研究D-熒光素鉀鹽公司熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。
D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活題成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見(jiàn)下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,構(gòu)建原位腫大的瘤模型,之后注入熒光素底物,通過(guò)IVIS系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評(píng)價(jià)等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。注:在抗腫大的瘤藥物藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測(cè)需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小,受腫大的瘤生長(zhǎng)所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評(píng)價(jià)腫大的瘤生長(zhǎng),在抗腫大的瘤藥效評(píng)價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)。D-熒光素也常用于體外研究。
熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng),其中**有7a70d2e3-5dda-4f49-84be-c6的是來(lái)自螢火蟲(chóng)體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類(lèi)螢光素酶,分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,同時(shí)近年來(lái)研究得較多的來(lái)源于高斯氏菌的高斯熒光素酶(Gaussluciferase)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過(guò)程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),可通過(guò)熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光,常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。螢火蟲(chóng)螢光素酶**通用和**常見(jiàn)的報(bào)告基因是北美螢火蟲(chóng)photinuspyralis的熒光素酶,該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度(體內(nèi))甚至沒(méi)有毒性,可用于原核和真核細(xì)胞。Amplite?螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(12518)使用無(wú)DTT**配方來(lái)定量活細(xì)胞和細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性。該測(cè)定基于螢火蟲(chóng)熒光素酶,螢火蟲(chóng)熒光素酶是一種單體的61kD酶,可催化熒光素的兩步氧化,在560nm處產(chǎn)生光。Amplite?螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒特點(diǎn):具有優(yōu)化的“混合讀取”測(cè)定規(guī)程,可與HTS液體處理儀器兼容具有高靈敏度。D-熒光素鉀鹽使用的注意事項(xiàng)。
注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲(chóng)熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2)注射方式、動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4妗?)對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),應(yīng)使用無(wú)鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測(cè)。7)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途!D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。常州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
D-熒光素鉀鹽測(cè)試怎么樣?鎮(zhèn)江熒光素D-熒光素鉀鹽濃度
從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級(jí)純()應(yīng)用:1)活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析;2)***用于報(bào)告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1)配制成100mM的儲(chǔ)存液(200×,濃度30mg/ml)。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,配制工作液(終濃度150μg/mL)。3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無(wú)殘留。4)圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析(或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào))。D-熒光素鉀鹽注:螢光素、螢光素酶、螢火蟲(chóng)螢光素酶、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱(chēng)作熒光素、熒光素酶、螢火蟲(chóng)熒光素酶、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽。Protocol2:Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。鎮(zhèn)江熒光素D-熒光素鉀鹽濃度
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