熒光素也就是FDAFDA可透過(guò)細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低,因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細(xì)胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和530nm。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類(lèi)使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存條件是-20℃干燥避光?;窗矡晒馑剽c鹽D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商
luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示:,在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),生成氧化熒光素(oxyluciferin),分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口,產(chǎn)品價(jià)格昂貴。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果。所以,需要國(guó)產(chǎn)化的方式生產(chǎn),一方面可以降低成本,一方面可以增強(qiáng)使用效果。作者:科遠(yuǎn)迪鏈接:zhuanlan./p/來(lái)源:知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。D-luciferin,potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光,一般是將Fireflyluciferase基因(由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,約50KD)即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶,培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)?;颉⒓?xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后,當(dāng)外源(腹腔或靜脈注射)給予其底物熒光素(D-luciferin,potassiumsalt,以下均簡(jiǎn)稱熒光素),即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長(zhǎng)在540-600nm。這種酶在ATP,氧存在的條件下,催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。南通熒光素酶D-熒光素鉀鹽應(yīng)用南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜。
我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過(guò)結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法。螢光素酶(英語(yǔ):Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類(lèi)使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。
故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測(cè)樣品中的微生物含量。APT熒光檢測(cè)儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測(cè)。1970年,科學(xué)家***次測(cè)定了螢火蟲(chóng)熒光素酶的結(jié)構(gòu);1985年,科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲(chóng)熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達(dá),從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學(xué)家們測(cè)定了該種螢火蟲(chóng)熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲(chóng)熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中,再注入熒光素,使*細(xì)胞發(fā)光,通過(guò)探測(cè)熒光,就能監(jiān)測(cè)*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理,用這種方法能對(duì)致病基因、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究,對(duì)某些疾病進(jìn)行診斷,監(jiān)測(cè)疫苗、藥物和治療方法的效力。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試品牌有哪些?
tetrametrylrhodarnineisothiocyante,TRITC)是一種紫紅色粉末,較穩(wěn)定,是羅達(dá)明(rhodamine)的衍生物。更大吸收光譜550urn,更大發(fā)射光譜620urn呈橙紅色熒光,與FITC發(fā)射的黃綠色熒光對(duì)比鮮明,常用于雙標(biāo)記染色。按照抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合步聚,免疫熒光法可分為以下三種。1.直接法用熒光素標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)的抗原結(jié)合,以檢查出相應(yīng)的抗原成分。2.間接法先用特異性抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合,洗去未結(jié)合的抗體,再用熒光素標(biāo)記的抗特異性抗體(間接熒光抗體)與特異性抗體相結(jié)合,形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的復(fù)合物。在此復(fù)合物上帶有比直接法更多的熒光抗體,所以,此法較直接法靈敏。3.補(bǔ)體法用特異性的抗體和補(bǔ)體的混合液與標(biāo)本上的抗原反應(yīng),補(bǔ)體就結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上,再用抗補(bǔ)體的熒光抗體與之相結(jié)合,就形成了抗原一抗體一補(bǔ)體一抗補(bǔ)體熒光抗體的復(fù)合物。熒光顯微鏡下所見(jiàn)到的發(fā)出熒光的部分即是抗原所在的部位。補(bǔ)體法具有敏感性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì),同時(shí)適用于各種不同種屬來(lái)源的特異性抗體的標(biāo)記顯示,在各種不同種屬動(dòng)物抗體的檢測(cè)上為更常用的技術(shù)方法熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱。D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術(shù)?上海熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
做D-熒光素鉀鹽測(cè)試工作液是先用現(xiàn)配?;窗矡晒馑剽c鹽D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商
熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段,可以對(duì)整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析:將不同類(lèi)型的細(xì)胞(骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等)標(biāo)記上(即表達(dá))熒光素酶,就可以用高敏感度的CCD相機(jī)進(jìn)行對(duì)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行活ti觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如熒光探測(cè)器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測(cè)到。這就使得對(duì)包括影響在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如,熒光素酶可以被用于檢測(cè)血庫(kù)中所存血液中的紅血球是否開(kāi)始破裂。法醫(yī)可以用含有熒光素酶的溶液來(lái)檢測(cè)犯罪現(xiàn)場(chǎng)中殘留的血跡。醫(yī)院用熒光素酶的發(fā)光來(lái)發(fā)現(xiàn)特定的疾病。熒光素酶還可以作為“報(bào)告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,例如,用于在轉(zhuǎn)染過(guò)熒光素酶的細(xì)胞中檢測(cè)特定啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平;這一技術(shù)被稱為報(bào)告基因檢測(cè)法或熒光素酶檢測(cè)法(LuciferaseAssay)。熒光素酶是一個(gè)熱敏感蛋白,因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過(guò)程中熱休克蛋白的保護(hù)能力?;窗矡晒馑剽c鹽D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商