熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶。間接體外成像是一種強大的研究手段，可以對整個動物體中的細(xì)胞群落進行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達）熒光素酶，就可以用高敏感度的CCD相機進行對動物體內(nèi)進行活ti觀察而不會傷害到動物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件，如熒光探測器或改進后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對包括影響在內(nèi)的多種生命活動進程進行觀察成為可能。例如，熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可以用含有熒光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用熒光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病。熒光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中，例如，用于在轉(zhuǎn)染過熒光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平；這一技術(shù)被稱為報告基因檢測法或熒光素酶檢測法（LuciferaseAssay）。熒光素酶是一個熱敏感蛋白，因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護能力。D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽公司
可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點：①非放射性；②比CAT及其他報告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時，在植物中的半衰期為3．5小時。由于半衰期短，故啟動子的改變會即時導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會積累。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號強度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。2．設(shè)計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質(zhì)粒備用。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用。同時準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對照，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中，生長10-24小時（80%匯合度）。6．將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測。8．加入底物，測定熒光素酶的活性。9．計算相對熒光強度，并與空載對照比較。揚州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用D-熒光素鉀鹽合作需要交押金嗎？
通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué)，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進行檢測。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理，并實現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進了其它ATP檢測平臺的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護基團偶聯(lián)，能對這些酶進行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團隊的建立，一種改進的luciferin面世，能更好地用于典型的報告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin。
Q：熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時具有更寬的動態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進行失蹤定位，并且其觀測不需裂解細(xì)胞，方便進行適時觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q：雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炥D(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞，另外陽性對照您可以選擇過表達的熒光蛋白質(zhì)粒，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結(jié)果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長是多少？
2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液；3）腹腔注射10-15min后進行成像分析。（對每只動物模型做熒光素動力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達的成像分析；2）***用于報告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液，可溶于甲醇和DMSO；后者易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性，特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。做D-熒光素鉀鹽測試真的靠譜嗎？螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像
D-熒光素鉀鹽使用的注意事項。熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽公司
就可以用高敏感度的CCD相機對動物體內(nèi)進行***觀察而不會傷害到動物本身。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件，如螢光探測器或改進后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對包括***在內(nèi)的多種生命活動進程進行觀察成為可能。例如，螢光素酶已經(jīng)被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術(shù)，借由dNTP接上DNA鏈時水解放出的焦磷酸，透過另外一個硫酸鹽腺甘酸轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)，螢光素酶能將產(chǎn)物ATP與螢光素轉(zhuǎn)化為冷光，機器借此探測光線并定序。螢光素酶也可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病。螢光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中，例如，用于在轉(zhuǎn)染過螢光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平；這一技術(shù)被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（LuciferaseAssay）。螢光素酶是一個熱敏感蛋白，因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護能力。此外，螢光素酶水母素的發(fā)光強度與環(huán)境中鈣離子濃度相關(guān)，因此可用于檢測生物體內(nèi)的鈣。熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽公司