蘇州EKBIO Tech細(xì)胞凍存液保質(zhì)期

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-07-03

    它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中,溫度達(dá)-196℃,理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的。原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以**大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。操作步驟編輯播報(bào)材料(一)儀器1.凈化工作臺(tái)2.離心機(jī)3.恒溫水浴箱4.冰箱(4℃、-20℃、-70℃)5.倒置相差顯微鏡6.培養(yǎng)箱7.液氮冰箱(二)玻璃器皿1.吸管(彎頭、直頭)2.培養(yǎng)瓶3.玻璃瓶(250ml、100ml)4.廢液缸(三)塑料器皿1.吸頭2.***頭3.膠塞4.移液管(10ml)(1~2ml)(四)其他物品1.微量加樣***2.紅血球計(jì)數(shù)板3.記號(hào)筆4.醫(yī)用橡皮膏(五)試劑(青霉素、鏈霉素)5.胰蛋白酶()。無(wú)血清細(xì)胞凍存液檢測(cè)的安全性如何保障?蘇州EKBIO Tech細(xì)胞凍存液保質(zhì)期

    用吸管吸出細(xì)胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,混勻;離心,1000rpm,5min;棄去上清液,加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度,接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。注意事項(xiàng):取錯(cuò)細(xì)胞:拿錯(cuò)凍存管。(快快快,匆忙之中,難免出錯(cuò),況且-170多度,凍手?。┙鉀Q:(1)核查記錄冊(cè)及凍存管上細(xì)胞的名稱(chēng)、時(shí)間是否一致。(2)拿細(xì)胞時(shí)戴手套!2.水浴時(shí)間太長(zhǎng):2min還沒(méi)融化。(凍存管的壁較厚,隔熱)解決:(1)適當(dāng)提高水浴溫度(37度-40度)。(2)要是冬天,就選用保溫盒。3.冰盒內(nèi)時(shí)間太長(zhǎng):復(fù)蘇1h后,還沒(méi)有加入新的培養(yǎng)液。(高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶,凍存時(shí)保護(hù)細(xì)胞,但復(fù)蘇融解后,浸泡時(shí)間太久會(huì),對(duì)細(xì)胞有毒性)解決:提前預(yù)定超凈臺(tái),減少?gòu)?fù)蘇后插在冰盒里等待的時(shí)間。4.失去耐心:復(fù)蘇三四天后,細(xì)胞沒(méi)有任何動(dòng)靜,認(rèn)為失敗,倒掉所有細(xì)胞。(有些細(xì)胞復(fù)蘇后一星期,才有起色)解決:不要換液,耐心等待,兩周后再做決定。一、細(xì)胞凍存液1.無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品概述:一種即用型、無(wú)需程序降溫的細(xì)胞凍存液,適用于哺乳動(dòng)物低溫保存。無(wú)需配制,使用簡(jiǎn)單,細(xì)胞復(fù)活率高。產(chǎn)品特點(diǎn):(1)安全:無(wú)血清。上海EKBIO Tech細(xì)胞凍存液配方無(wú)血清細(xì)胞凍存液有哪些優(yōu)勢(shì)?

    無(wú)血清細(xì)胞凍存液,含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),**提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。無(wú)血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,無(wú)動(dòng)物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存,無(wú)需冷凍,即取即用。凍存細(xì)胞,無(wú)需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。1.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。2.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ)。3.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于其他類(lèi)型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的儲(chǔ)存。1.不含牛血清,無(wú)動(dòng)物源組分。傳統(tǒng)的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛,因此,難以應(yīng)用到需要避免接觸動(dòng)物源的應(yīng)用領(lǐng)域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無(wú)動(dòng)物源組分?!婕纯煞€(wěn)定保存,無(wú)需冷凍,即取即用。為了避免反復(fù)凍融,傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液,需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液,2-8℃保存即可,無(wú)需再進(jìn)行分裝。在體外培養(yǎng)工作中,為了保留種子和長(zhǎng)期保存培養(yǎng)物的活性。

    分析純)或無(wú)色新鮮甘油步驟(一)細(xì)胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。3.去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);4.離心1000rpm,5min;5.去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml~1×107/ml;6.將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~ml;7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng),凍存時(shí)間及操作者;8.凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。(二)細(xì)胞復(fù)蘇1.從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃溫水中,并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。2.從37℃水浴中取出凍存管,打開(kāi)蓋子,用吸管吸出細(xì)胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,混勻;3.離心,1000rpm,5min;4.棄去上清液,加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度,接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);5.次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。無(wú)血清細(xì)胞凍存液說(shuō)明書(shū)。

    產(chǎn)品描述無(wú)血清細(xì)胞凍存液【無(wú)血清細(xì)胞凍存液用途與描述】1、無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于免疫細(xì)胞及干細(xì)胞的存儲(chǔ)。2、細(xì)胞保藏中心,無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于細(xì)胞株的長(zhǎng)期保存。3、科研高校,無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于細(xì)胞株凍存。4、無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于醫(yī)院樣本庫(kù)細(xì)胞樣本保存。支持高密度凍存MSC細(xì)胞(1-2x107cells/mL),為常規(guī)血清凍存液的10倍。無(wú)血清細(xì)胞凍存液,含多種保護(hù)劑成分,一些保護(hù)劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量。我公司無(wú)血清細(xì)胞凍存液,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),極大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率?!緹o(wú)血清細(xì)胞凍存液規(guī)格與保存】產(chǎn)品貨號(hào)產(chǎn)品名稱(chēng)產(chǎn)品規(guī)格保存條件有限期限無(wú)血清細(xì)胞凍存液100mL/瓶2-8℃保存12個(gè)月【無(wú)血清細(xì)胞凍存液主要成份】無(wú)血清細(xì)胞凍存液的主要成分:氨基酸,維生素,無(wú)機(jī)鹽,白蛋白,冷凍保護(hù)劑。【無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用方法】1、細(xì)胞凍存前準(zhǔn)備a)要求凍存的細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,且活率大于90%。b)計(jì)算細(xì)胞密度,一般要求密度在1-3x106cells/mL。做無(wú)血清細(xì)胞凍存液的哪家便宜。a549細(xì)胞凍存

無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用的是什么技術(shù)?蘇州EKBIO Tech細(xì)胞凍存液保質(zhì)期

    不同細(xì)胞系請(qǐng)參照附表。細(xì)胞系凍存密度備注正常人成纖維細(xì)胞1-3x106cells/mL雜交瘤細(xì)胞1-3x106cells/mL某些hybridoma會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24小時(shí)后死去。貼壁腫瘤細(xì)胞5-7x106cells/mLHela除外,1~3×106cells/ml即可其他懸浮細(xì)胞5-10x106cells/mL人淋巴細(xì)胞高密度凍存效果好干細(xì)胞類(lèi)1-2x107cells/mL支持高密度凍存MSC細(xì)胞,為常規(guī)血清凍存液的10倍。2、細(xì)胞凍存過(guò)程a)將要凍存的細(xì)胞懸液,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)后離心,800轉(zhuǎn),3min即可。b)棄去上清,將4度保存的無(wú)血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中,根據(jù)密度調(diào)整細(xì)胞凍存液用量。c)反復(fù)吹吸混勻后,分裝于細(xì)胞凍存管中,每管500ul-1000ul(建議500ul/管)。d)將分裝好的細(xì)胞凍存管,直接置于-80度冰箱過(guò)夜保存,次日投入液氮中保存即可。特別提醒:1.凍存過(guò)程中,第2步和第3步在冰袋附近操作時(shí),低溫避免保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞造成損傷。2.細(xì)胞凍存管一定要保證完全密封,否則在復(fù)蘇過(guò)程中有可能會(huì)炸裂。3、細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程a)提前開(kāi)啟水浴鍋,溫度調(diào)節(jié)到37度。b)將凍存的細(xì)胞冷凍管從液氮中取出,迅速置于水浴鍋中,盡量1min內(nèi)融化,時(shí)間越短對(duì)細(xì)胞影響越小。蘇州EKBIO Tech細(xì)胞凍存液保質(zhì)期