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2)按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液;3)腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析。(對每只動物模型做熒光素動力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時間)Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式:C11H8N2O3S2分子量:g/mol外觀:白色至淺黃色粉末溶解:,形成近乎無色至淺黃色的清夜保存:-15°C避光應(yīng)用:1)活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析;2)***用于報告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,可溶于甲醇和DMSO;后者易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。D-熒光素鉀鹽檢測的安全性如何保障?熒光素二乙酸
通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué),例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,并實現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,能更好地用于典型的報告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin。泰州ATPD-熒光素鉀鹽使用說明D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司?
常見的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renillaluciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發(fā)光(不同底物光的顏色和波長不同),當(dāng)?shù)孜镞^量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。***成像技術(shù)(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術(shù),生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學(xué)發(fā)光的原理,將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動物體內(nèi),與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng),利用光學(xué)系統(tǒng)檢測光強(qiáng)度,間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位。這項技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域常用的有**或疾病動物模型的建立,并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究、干細(xì)胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin(D熒光素)的分類:D-Luciferin:有三種,分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素。
螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,并啟動了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計劃,通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性。當(dāng)時的人們認(rèn)為,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點,可能會對分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個月后,***代螢火蟲螢光素酶報告基因載體和檢測試劑在Promega誕生,使這項新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù)。隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)***的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測系統(tǒng)。D-熒光素有時候也叫游離酸。
更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。免疫熒光法免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素,當(dāng)與其相對應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時,在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,檢測出抗原或抗體。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素(fluoreceinisothiocyante,F(xiàn)ITC),為黃色、橙黃色或褐黃色結(jié)晶粉末,有兩種異構(gòu)體,易溶于水和酒精等溶劑。分子量為389,更大吸收光譜為490~495,更大發(fā)射光譜為520~530urn,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,是更常用的標(biāo)記抗體的熒光素。②四甲基異氰酸羅達(dá)明。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。無錫熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期
D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光。熒光素二乙酸
LAR)Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外,pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報告基因上,通過生物信息學(xué)和合成方法,實現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶(Enliten)基礎(chǔ)上,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后,通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué),例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理。熒光素二乙酸
南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團(tuán)隊十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測試劑、非編碼 RNA 提取與檢測試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細(xì)胞、動物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國各級高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司,是一家集研發(fā)、設(shè)計、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。翌科生物擁有一支經(jīng)驗豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測試劑,轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺,以應(yīng)用為重點,以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價值,提供更優(yōu)服務(wù)。翌科生物創(chuàng)始人金芳芳,始終關(guān)注客戶,創(chuàng)新科技,竭誠為客戶提供良好的服務(wù)。