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熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結(jié)合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應(yīng)體系中,隨著 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結(jié)合的熒光染料也越來(lái)越多,熒光信號(hào)強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化,就可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR 反應(yīng)的進(jìn)程。過(guò)程:在 PCR 反應(yīng)的每一個(gè)循環(huán)中,當(dāng)溫度降低到退火溫度時(shí),引物與模板結(jié)合,DNA 聚合酶開(kāi)始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時(shí),熒光染料會(huì)結(jié)合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會(huì)在特定的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加,熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng),當(dāng)信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí),對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)(Ct 值)。定量依據(jù):在一定的范圍內(nèi),起始模板量與 Ct 值呈對(duì)數(shù)關(guān)系。即起始模板量越多,達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少,Ct 值越小;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)待測(cè)樣本的 Ct 值,就可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出其對(duì)應(yīng)的起始模板量。染料的純度、熒光量子產(chǎn)率及與核酸的結(jié)合特性等很重要。無(wú)錫Cy5熒光定量PCR儀廠家供應(yīng)
杭州柏恒熒光定量PCR儀Q9600Pro采用LED光源設(shè)計(jì),這一設(shè)計(jì)不僅實(shí)現(xiàn)了節(jié)能環(huán)保,也提高了設(shè)備的穩(wěn)定性和使用壽命。LED光源作為一種高效節(jié)能的照明技術(shù),不僅減少了能源的消耗,還減少了對(duì)環(huán)境的污染,符合現(xiàn)代社會(huì)對(duì)可持續(xù)發(fā)展的要求。LED光源的節(jié)能優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在多個(gè)方面。首先,LED光源在發(fā)光過(guò)程中幾乎不會(huì)產(chǎn)生熱量,相比傳統(tǒng)的白熾燈泡或熒光燈管,LED的能源利用率更高,能夠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中***降低能源消耗。其次,LED光源的發(fā)光原理與傳統(tǒng)燈泡不同,LED是通過(guò)半導(dǎo)體發(fā)光,不需要加熱絲或熒光粉等材料,因此功耗更低,使用壽命更長(zhǎng),無(wú)需頻繁更換燈管,省去了不必要的維護(hù)費(fèi)用。此外,LED光源的長(zhǎng)壽命也是其優(yōu)勢(shì)之一。LED的壽命通??梢赃_(dá)到數(shù)萬(wàn)小時(shí)甚至更長(zhǎng),遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)傳統(tǒng)的照明設(shè)備,減少了設(shè)備的維護(hù)頻率和更換成本。LED光源具有低損耗、高穩(wěn)定性的特點(diǎn),能夠長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定的光照強(qiáng)度和波長(zhǎng),確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和可靠性??蒲腥藛T可以更加放心地進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn),而不必?fù)?dān)心光源的降解和影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。除了節(jié)能和長(zhǎng)壽命外,LED光源還具有無(wú)汞、無(wú)紫外輻射等環(huán)保特點(diǎn)。LED光源不含有有害物質(zhì),不產(chǎn)生紫外輻射,對(duì)實(shí)驗(yàn)樣品和操作人員更加安全無(wú)害。同時(shí)。 南京Cy5.5熒光定量PCR儀品牌排行TET 熒光定量 PCR 儀的熱循環(huán)系統(tǒng)能夠準(zhǔn)確地控制溫度的升降速率和保溫時(shí)間,PCR 反應(yīng)在溫度條件下進(jìn)行。
熒光標(biāo)記探針?lè)ㄔ恚菏褂靡环N特異性的熒光標(biāo)記探針,它能與目標(biāo) DNA 序列雜交。探針的 5' 端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán),3' 端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。在游離狀態(tài)下,報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光會(huì)被淬滅基團(tuán)吸收,無(wú)法檢測(cè)到熒光信號(hào)。當(dāng) PCR 反應(yīng)進(jìn)行時(shí),DNA 聚合酶在延伸引物的過(guò)程中,會(huì)將探針?biāo)?,使?bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)就可以被儀器檢測(cè)到。每擴(kuò)增一條 DNA 鏈,就會(huì)有一個(gè)探針被水解,釋放出一個(gè)熒光信號(hào),熒光信號(hào)的強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量成正比。過(guò)程:在 PCR 反應(yīng)的退火階段,熒光標(biāo)記探針會(huì)與目標(biāo) DNA 序列特異性結(jié)合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會(huì)將探針從 5' 端開(kāi)始逐個(gè)水解,使報(bào)告基團(tuán)游離出來(lái),產(chǎn)生熒光信號(hào)。儀器會(huì)在每個(gè)循環(huán)的延伸階段檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度,隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行,熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng),同樣可以得到 Ct 值。定量依據(jù):與熒光染料法類似,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)待測(cè)樣本的 Ct 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出起始模板量。由于熒光標(biāo)記探針具有特異性,能與特定的目標(biāo)序列雜交,因此可以更準(zhǔn)確地對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行定量分析,減少非特異性擴(kuò)增的干擾。
FAM并不是一種特定的熒光定量PCR儀品牌或型號(hào),而是一種在熒光定量PCR中常用的熒光染料。FAM(Fluoresceinamidite)即羧基熒光素,具有高量子產(chǎn)率,在被特定波長(zhǎng)的光激發(fā)后會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光,其激發(fā)波長(zhǎng)通常在495nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)在520nm左右。由于其熒光特性穩(wěn)定且靈敏,被廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中,作為報(bào)告分子來(lái)對(duì)目標(biāo)DNA或RNA進(jìn)行定量檢測(cè)。很多熒光定量PCR儀都可以使用FAM染料進(jìn)行檢測(cè),例如賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。這些儀器通常配備有能激發(fā)FAM染料發(fā)光的光源以及能檢測(cè)其發(fā)射熒光的光學(xué)系統(tǒng)。以QuantStudio?1Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為例,它配備4種常用的激發(fā)和發(fā)射濾光片,包括FAM、VIC、ROX和Cy5,其激發(fā)光源為白光LED,激發(fā)范圍為455至530nm,可滿足FAM染料的激發(fā)需求。純度差,含有蛋白質(zhì)、多糖、酚類等雜質(zhì),會(huì)抑制 PCR 反應(yīng),降低擴(kuò)增效率,影響熒光信號(hào)強(qiáng)度。
儀器提示或報(bào)錯(cuò)儀器軟件可能會(huì)提示光路系統(tǒng)出現(xiàn)故障或異常,如 “熒光信號(hào)異?!薄肮饴沸?zhǔn)錯(cuò)誤” 等報(bào)錯(cuò)信息。這是儀器自身檢測(cè)到光路系統(tǒng)存在問(wèn)題,需要進(jìn)行校準(zhǔn)或維修的直接提示。儀器使用時(shí)間和環(huán)境因素使用時(shí)間:如果儀器已經(jīng)使用了較長(zhǎng)時(shí)間,如超過(guò)一年且頻繁使用,即使沒(méi)有出現(xiàn)明顯的異?,F(xiàn)象,也建議按照廠家的建議定期對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以確保儀器始終保持良好的性能。環(huán)境變化:儀器所處的環(huán)境發(fā)生較大變化,如溫度、濕度劇烈波動(dòng),或者儀器經(jīng)過(guò)搬運(yùn)、移動(dòng)后,可能會(huì)導(dǎo)致光路系統(tǒng)的部件發(fā)生微小位移或性能改變,此時(shí)也需要對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。TET 并不是一種特定品牌或型號(hào)的熒光定量 PCR 儀,而是一種熒光染料的名稱。蘇州CY3熒光定量PCR儀市場(chǎng)報(bào)價(jià)
在藥物研發(fā)過(guò)程中,可用于評(píng)估藥物對(duì)基因表達(dá)的影響。無(wú)錫Cy5熒光定量PCR儀廠家供應(yīng)
SYBR Green I是一種雙鏈 DNA 結(jié)合染料,它能非特異性地嵌入雙鏈 DNA 的小溝中。在游離狀態(tài)下,SYBR Green I 發(fā)出微弱的熒光,但當(dāng)它與雙鏈 DNA 結(jié)合后,熒光信號(hào)會(huì)明顯增強(qiáng)。在熒光定量 PCR 反應(yīng)中,隨著 PCR 產(chǎn)物的不斷合成,SYBR Green I 與雙鏈 DNA 結(jié)合,熒光信號(hào)強(qiáng)度不斷增加,通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)反映 PCR 產(chǎn)物的量,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。特點(diǎn):能與所有雙鏈 DNA 結(jié)合,不依賴于特定的序列,因此可用于各種 DNA 模板的定量分析,通用性強(qiáng)。其激發(fā)波長(zhǎng)約為 497nm,發(fā)射波長(zhǎng)約為 520nm,熒光顏色為綠色。但由于它非特異性結(jié)合雙鏈 DNA,可能會(huì)對(duì)引物二聚體等非特異性產(chǎn)物也產(chǎn)生熒光信號(hào),需要通過(guò)熔解曲線分析等方法來(lái)區(qū)分特異性產(chǎn)物和非特異性產(chǎn)物。無(wú)錫Cy5熒光定量PCR儀廠家供應(yīng)