熒光定量 PCR 儀是一種通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程的儀器。工作原理:在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè) PCR 進(jìn)程。隨著 PCR 擴(kuò)增的進(jìn)行,每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),熒光信號(hào)就會(huì)相應(yīng)增加。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化,就可以判斷 DNA 的擴(kuò)增情況,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)初始模板的定量分析。常用的熒光化學(xué)物質(zhì)有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針?lè)ㄖ校结樛暾麜r(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR 擴(kuò)增時(shí),Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺?DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。對(duì)于一些隱性遺傳疾病,熒光定量 PCR 儀可用于檢測(cè)個(gè)體是否為致病基因的攜帶者。鎮(zhèn)江96孔熒光定量PCR儀檢測(cè)
熒光定量 PCR 儀的檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到多種因素的影響,包括儀器設(shè)備、試劑質(zhì)量、樣本處理以及實(shí)驗(yàn)操作等方面,。加樣準(zhǔn)確性:在配制反應(yīng)體系和加樣過(guò)程中,移液器的使用不準(zhǔn)確會(huì)導(dǎo)致試劑和樣本的加入量出現(xiàn)偏差。例如,加樣量過(guò)多或過(guò)少都會(huì)影響反應(yīng)體系中各成分的濃度,進(jìn)而影響擴(kuò)增效率和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。反應(yīng)體系配制:反應(yīng)體系中各成分的比例要準(zhǔn)確配制。如果引物、探針、酶、dNTP 等成分的濃度過(guò)高或過(guò)低,都會(huì)影響 PCR 反應(yīng)的特異性和效率,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。此外,反應(yīng)體系中若存在氣泡,可能會(huì)影響熱傳遞和熒光信號(hào)的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)環(huán)境:實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度等條件也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。例如,環(huán)境溫度過(guò)高或過(guò)低可能影響酶的活性和反應(yīng)速率,濕度較大可能導(dǎo)致試劑吸潮變質(zhì),從而影響檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。揚(yáng)州YELLOW熒光定量PCR儀電話通過(guò)檢測(cè)孕婦外周血中的胎兒游離 DNA 或羊水、絨毛等樣本中的胎兒基因,可對(duì)胎兒進(jìn)行遺傳性疾病的早期診斷。
熒光定量 PCR 儀應(yīng)用領(lǐng)域:基礎(chǔ)科研基因表達(dá)分析:研究特定基因在不同組織、細(xì)胞以及不同生理狀態(tài)或處理?xiàng)l件下的表達(dá)水平,有助于深入理解基因的功能和調(diào)控機(jī)制。基因功能研究:通過(guò)定量分析基因表達(dá)的變化,探討基因在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過(guò)程中的作用,以及基因之間的相互調(diào)控關(guān)系。農(nóng)業(yè)研究:作物遺傳改良:檢測(cè)植物基因組中的突變和表達(dá)量變化,評(píng)估作物的生長(zhǎng)發(fā)育情況和適應(yīng)性,為作物品種選育和遺傳改良提供依據(jù)。植物病蟲(chóng)害檢測(cè):快速檢測(cè)植物病原體,如病毒、細(xì)菌、等,有助于及時(shí)采取防治措施,保障農(nóng)作物產(chǎn)量和質(zhì)量。
儀器提示或報(bào)錯(cuò)儀器軟件可能會(huì)提示光路系統(tǒng)出現(xiàn)故障或異常,如 “熒光信號(hào)異?!薄肮饴沸?zhǔn)錯(cuò)誤” 等報(bào)錯(cuò)信息。這是儀器自身檢測(cè)到光路系統(tǒng)存在問(wèn)題,需要進(jìn)行校準(zhǔn)或維修的直接提示。儀器使用時(shí)間和環(huán)境因素使用時(shí)間:如果儀器已經(jīng)使用了較長(zhǎng)時(shí)間,如超過(guò)一年且頻繁使用,即使沒(méi)有出現(xiàn)明顯的異?,F(xiàn)象,也建議按照廠家的建議定期對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以確保儀器始終保持良好的性能。環(huán)境變化:儀器所處的環(huán)境發(fā)生較大變化,如溫度、濕度劇烈波動(dòng),或者儀器經(jīng)過(guò)搬運(yùn)、移動(dòng)后,可能會(huì)導(dǎo)致光路系統(tǒng)的部件發(fā)生微小位移或性能改變,此時(shí)也需要對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。這有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)胎兒的遺傳缺陷,為家庭提供生育決策的依據(jù),減少出生缺陷的發(fā)生。
技術(shù)創(chuàng)新推動(dòng):納米熒光探針商業(yè)化落地,如量子點(diǎn)熒光標(biāo)記技術(shù)使檢測(cè)靈敏度大幅提升,推動(dòng)相關(guān)設(shè)備在疾控中心的采購(gòu)量增長(zhǎng)。多模態(tài)檢測(cè)平臺(tái)興起,熒光 — 質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)在早篩領(lǐng)域的應(yīng)用,成為三甲醫(yī)院設(shè)備更新的優(yōu)先選項(xiàng)。智能化設(shè)備占比將不斷提升,2025 年智能化設(shè)備占比預(yù)計(jì)將突破 40%,AI 驅(qū)動(dòng)的全流程自動(dòng)化可將檢測(cè)時(shí)間大幅壓縮,誤差率也更低。市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)加?。?023 年 PCR 儀市場(chǎng)占有率排名的品牌合計(jì)占有 70.73% 的市場(chǎng)份額,而 2019 年合計(jì)占有率為 94.5%,市場(chǎng)集中度變低,大量新玩家涌入,市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)變得更加激烈。各廠家不斷創(chuàng)造新的產(chǎn)品形態(tài),開(kāi)辟新的應(yīng)用領(lǐng)域,以爭(zhēng)取更大的市場(chǎng)份額。染料的純度、熒光量子產(chǎn)率及與核酸的結(jié)合特性等很重要。蘇州JOE熒光定量PCR儀功能
TET 并不是一種特定品牌或型號(hào)的熒光定量 PCR 儀,而是一種熒光染料的名稱。鎮(zhèn)江96孔熒光定量PCR儀檢測(cè)
選擇適合自己的熒光定量 PCR 儀,需要綜合考慮多個(gè)因素,實(shí)驗(yàn)類型:如果是進(jìn)行常規(guī)的基因表達(dá)分析、病原體定量檢測(cè),普通的單通道或多通道熒光定量 PCR 儀即可滿足需求。例如,賽默飛世爾的 QuantStudio 3,適用于基礎(chǔ)的基因表達(dá)和病原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。若是涉及到復(fù)雜的多重 PCR 實(shí)驗(yàn)、SNP 基因分型,則需要選擇具有更多熒光通道、更高分辨率的儀器,如羅氏的 LightCycler 480,可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)熒光信號(hào),適用于多重分析。通量要求:根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量來(lái)選擇。對(duì)于樣本量較少的實(shí)驗(yàn),如小型實(shí)驗(yàn)室的科研項(xiàng)目或臨床診斷的少量樣本檢測(cè),96 孔板的熒光定量 PCR 儀就足夠,如伯樂(lè)的 CFX96。而對(duì)于高通量的檢測(cè)需求,如大規(guī)模的基因篩查、藥物研發(fā)中的大量樣本篩選,可能需要選擇 384 孔板的儀器,如 ABI 7900HT,能提高實(shí)驗(yàn)效率,減少實(shí)驗(yàn)成本。鎮(zhèn)江96孔熒光定量PCR儀檢測(cè)