ROX通常并不指代一種特定的熒光定量PCR儀,而是一種熒光染料,在熒光定量PCR中常被用作被動參考染料。其作用是用于校正熒光信號,減少孔與孔之間由于加樣誤差、反應體積差異、光學系統的微小變化以及蒸發(fā)等因素導致的熒光信號波動,提高實驗的準確性和重復性。在實時熒光定量PCR儀的使用中,很多儀器都可以兼容ROX染料進行信號校正。例如,賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型號的熒光定量PCR儀都支持ROX染料。不同的熒光定量PCR儀在檢測通道、光學系統、熱循環(huán)性能等方面存在差異,但只要其具備相應的熒光檢測通道,能夠檢測ROX染料的熒光信號,并在軟件中支持以ROX信號作為參考進行數據校正,就可以在實驗中使用ROX染料來輔助提高定量分析的準確性。例如,QuantStudio1實時熒光定量PCR儀采用新型Optiflex光學檢測架構,提供FAM、VIC和ROX三種常用激發(fā)和發(fā)射濾光片,實現3重實時定量分析。判斷食品是否含有轉基因成分以及轉基因成分的含量,保障消費者的知情權和選擇權。無錫Cy5熒光定量PCR儀哪個好
SYBR Green I是一種雙鏈 DNA 結合染料,它能非特異性地嵌入雙鏈 DNA 的小溝中。在游離狀態(tài)下,SYBR Green I 發(fā)出微弱的熒光,但當它與雙鏈 DNA 結合后,熒光信號會明顯增強。在熒光定量 PCR 反應中,隨著 PCR 產物的不斷合成,SYBR Green I 與雙鏈 DNA 結合,熒光信號強度不斷增加,通過檢測熒光強度的變化來反映 PCR 產物的量,從而實現對起始模板的定量分析。特點:能與所有雙鏈 DNA 結合,不依賴于特定的序列,因此可用于各種 DNA 模板的定量分析,通用性強。其激發(fā)波長約為 497nm,發(fā)射波長約為 520nm,熒光顏色為綠色。但由于它非特異性結合雙鏈 DNA,可能會對引物二聚體等非特異性產物也產生熒光信號,需要通過熔解曲線分析等方法來區(qū)分特異性產物和非特異性產物。EVA-Green熒光定量PCR儀廠家供應TET 染料與核酸的結合具有較高的特異性和穩(wěn)定性,能夠在 PCR 反應過程中準確地指示目標核酸的擴增情況;
杭州柏恒的熒光定量PCR儀Q9600Pro是一款高效、快速的實驗設備,突破性地實現了在短短5秒內完成96個樣本所有熒光通道的檢測。這一令人驚嘆的速度不僅提高了實驗效率,也**縮短了實驗時間,為科研工作者節(jié)省了寶貴的時間。Q9600Pro的快速檢測功能得益于其先進的技術和創(chuàng)新的設計。其高度精密的光學系統和敏感的探測器能夠迅速捕獲樣本中的熒光信號,并快速并行地對96個樣本進行檢測。同時,設備在檢測過程中實現了高度自動化,**減少了人為干預的需求,保證了實驗的一致性和可靠性。除了快速性外,Q9600Pro還具有出色的準確性和靈敏度。其精密的溫控系統和穩(wěn)定的光路設計保證了不同通道間的溫度和光照均勻性,有效避免了實驗的偏差。此外,設備使用高質量的濾光片和光學元件,確保了熒光信號的精確檢測,靈敏度高,可以準確測量微量目標物質,并避免假陽性結果的產生。另外,Q9600Pro具有直觀友好的操作界面和強大的數據處理功能??蒲腥藛T可以通過設備的觸摸屏控制面板輕松設置實驗參數,并實時監(jiān)控實驗進度和結果。設備配備的專業(yè)分析軟件能夠快速處理檢測數據,生成可視化的結果圖表,有助于科研人員快速準確地解讀實驗結果,加快研究進展。
選擇適合自己的熒光定量 PCR 儀,需要綜合考慮多個因素,實驗類型:如果是進行常規(guī)的基因表達分析、病原體定量檢測,普通的單通道或多通道熒光定量 PCR 儀即可滿足需求。例如,賽默飛世爾的 QuantStudio 3,適用于基礎的基因表達和病原體檢測實驗。若是涉及到復雜的多重 PCR 實驗、SNP 基因分型,則需要選擇具有更多熒光通道、更高分辨率的儀器,如羅氏的 LightCycler 480,可同時檢測多個熒光信號,適用于多重分析。通量要求:根據實驗樣本數量來選擇。對于樣本量較少的實驗,如小型實驗室的科研項目或臨床診斷的少量樣本檢測,96 孔板的熒光定量 PCR 儀就足夠,如伯樂的 CFX96。而對于高通量的檢測需求,如大規(guī)模的基因篩查、藥物研發(fā)中的大量樣本篩選,可能需要選擇 384 孔板的儀器,如 ABI 7900HT,能提高實驗效率,減少實驗成本。結核分枝桿菌的檢測,傳統的培養(yǎng)方法需要數周時間;
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點,被廣泛應用于多個行業(yè),以下是一些主要的應用行業(yè):生命科學研究行業(yè)基因表達分析:是研究基因表達調控的重要工具,可精確測定不同組織、不同發(fā)育階段以及不同生理病理條件下基因的表達水平,有助于深入了解基因的功能和生物過程的分子機制?;蚬δ苎芯浚和ㄟ^對基因敲除、過表達或 RNA 干擾等模型中相關基因表達量的定量分析,驗證基因的功能,揭示基因之間的相互作用關系。分子進化研究:分析不同物種或同一物種不同個體之間基因受到儀器的整體性能、光學系統設計、熒光染料質量以及數據處理算法等多種因素的綜合影響。鎮(zhèn)江VIC熒光定量PCR儀詢問報價
能夠準確地識別出微弱的熒光信號變化,從而實現對低水平核酸表達的檢測。無錫Cy5熒光定量PCR儀哪個好
熒光標記探針法原理:使用一種特異性的熒光標記探針,它能與目標 DNA 序列雜交。探針的 5' 端標記有熒光報告基團,3' 端標記有熒光淬滅基團。在游離狀態(tài)下,報告基團發(fā)出的熒光會被淬滅基團吸收,無法檢測到熒光信號。當 PCR 反應進行時,DNA 聚合酶在延伸引物的過程中,會將探針水解,使報告基團與淬滅基團分離,報告基團發(fā)出的熒光信號就可以被儀器檢測到。每擴增一條 DNA 鏈,就會有一個探針被水解,釋放出一個熒光信號,熒光信號的強度與 PCR 產物的數量成正比。過程:在 PCR 反應的退火階段,熒光標記探針會與目標 DNA 序列特異性結合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針從 5' 端開始逐個水解,使報告基團游離出來,產生熒光信號。儀器會在每個循環(huán)的延伸階段檢測熒光信號的強度,隨著 PCR 反應的進行,熒光信號逐漸增強,同樣可以得到 Ct 值。定量依據:與熒光染料法類似,通過標準品建立標準曲線,根據待測樣本的 Ct 值在標準曲線上計算出起始模板量。由于熒光標記探針具有特異性,能與特定的目標序列雜交,因此可以更準確地對目標基因進行定量分析,減少非特異性擴增的干擾。無錫Cy5熒光定量PCR儀哪個好