目前對我國首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測定,分析其進(jìn)化來源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測序儀進(jìn)行病毒全基因組測定.對獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對、進(jìn)化樹構(gòu)建和關(guān)鍵位點分析.結(jié)果通過測定獲得了病毒全基因組11979nt,該測定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(＞98％)。病毒Gn蛋白C端信號肽區(qū)存在1個氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。
病毒全基因組測序平臺，鍛煉出—批精通測序的檢測隊伍。RNA二代測序分析檢測
病毒全基因組測序定：探普生物對病毒的全基因組進(jìn)行測序的實驗基于二代測序技術(shù)。樣本經(jīng)過核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這3大基本流程后轉(zhuǎn)換成了序列數(shù)據(jù)。先，在核酸純化環(huán)節(jié)，探普提供專門針對性的核酸純化樣本指南，以提高目的物種的核酸純度和得率，與此同時探普生物也提供核酸純化服務(wù)。第二，文庫構(gòu)建環(huán)節(jié)，樣本的核酸具備濃度低，總量少的特點。探普生物專門針對這一點開發(fā)了超微量核酸文庫構(gòu)建，可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構(gòu)建成測序文庫。第三，生物信息學(xué)分析環(huán)節(jié)。生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對病毒的全基因組進(jìn)行測序的下機數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點，優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫，搭載了專門用的的生物信息學(xué)分析流程，可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。
病毒測序診斷探普生物的分析流程，可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)病毒序列。
能實現(xiàn)對病毒的全基因組進(jìn)行測序的技術(shù)手段：早期在高通量測序技術(shù)普及之前，對病毒的全基因組進(jìn)行測序是通過非特異性擴增+克隆結(jié)合sanger測序來完成的。當(dāng)物種有了參考的序列之后，可以通過特異性擴增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準(zhǔn)確度高，讀長很長，但與此同時，擴增和克隆工作費時費力，由于流程繁瑣，加上快速變異導(dǎo)致引物無法通用，該方法對于大量基因組的測序工作而言，可操作性不強，這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術(shù)正式啟用之后，研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測序和分析，減少了工作量，增加了成功率。探普生物進(jìn)行了大量有針對性的研發(fā)和測試，開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進(jìn)行測序，該流程自運行以來廣受研究者們好評。
病毒的蛋白組成的特點是什么？ （1）結(jié)構(gòu)蛋白由病毒的基因組編碼，結(jié)構(gòu)蛋白組成病毒體的蛋白成分如病毒體的衣殼蛋白、基質(zhì)蛋白和包膜蛋白。?? （2）非結(jié)構(gòu)蛋白由病毒的基因組編碼，但非結(jié)構(gòu)蛋白不參與病毒體構(gòu)成的蛋白成分。非結(jié)構(gòu)蛋白可存在于病毒體內(nèi)，如病毒的酶就屬于非結(jié)構(gòu)蛋白，也可存在于侵染細(xì)胞。?? 病毒結(jié)構(gòu)蛋白有以下幾種功能：①病毒結(jié)構(gòu)蛋白可保護病毒核酸，避免環(huán)境中的核酸酶和其他理化因素對病毒核酸造成破壞；②病毒結(jié)構(gòu)蛋白可參與病毒的侵染過程，衣殼蛋白和包膜上的蛋白突起能吸附至易感細(xì)胞受體，引起侵染；③具有抗原***毒基因編碼的衣殼蛋白和包膜蛋白具有良好的抗原性，能刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。高通量測序技術(shù)正式啟用之后，研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測序和分析.
病毒全基因組測序注意事項：病毒全基因組測序，測序覆蓋度，基因組被測序得到的堿基覆蓋的比例；測序覆蓋度是反映測序隨機性的指標(biāo)之一；測序序深度與覆蓋度之間的關(guān)系可以過Lander-WatermanModel（1988）來確定。當(dāng)深度達(dá)到5X時，則可覆蓋基因組的約99.4%以上。通過生物信息手段，分析不同個體基因組間的結(jié)構(gòu)差異，同時完成SNP及基因組結(jié)構(gòu)注釋。DNA突變可誘發(fā)病癥。吸煙過程中所釋放的>60種致病化學(xué)物質(zhì)可與DNA結(jié)合并對DNA鏈上的鳥嘌呤和腺嘌呤進(jìn)行化學(xué)修飾從而產(chǎn)生大的加合物，該加合物改變了DNA雙螺旋的結(jié)構(gòu)，如果不被核苷酸剪切修復(fù)或其他的途徑進(jìn)行糾正，那么DNA在復(fù)制時就會按照non-Watson-Crick方式進(jìn)行復(fù)制并阻止RNA聚合酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。
高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測序和分析.病毒測序診斷
團隊具備普通測序?qū)嶒灪头治龌A(chǔ)。RNA二代測序分析檢測
病毒（Virus）由一種核酸分子（DNA或RNA）與蛋白質(zhì)（Protein）構(gòu)成或由蛋白質(zhì)構(gòu)成（如朊病毒）。根據(jù)遺傳物質(zhì)的組成，可分為單鏈DNA病毒（ssDNA）、雙鏈DNA病毒（dsDNA）、單鏈RNA病毒（ssRNA）、雙鏈RNA病毒（dsRNA）和蛋白質(zhì)病毒（如朊病毒）。根據(jù)宿主類型的不同，可以分為噬菌體（細(xì)菌病毒）、植物病毒（煙花葉病毒）和動物病毒（如禽流感病毒、天花病毒和HIV等）。病毒全基因組測序（VirusWholeGenomeSequencing，VWGS），是指基于第二代高通量測序技術(shù)，對病毒全基因組進(jìn)行測序，利用生物信息分析手段，得到病毒的全基因組序列，解析編碼信息，并獲得相應(yīng)的變異信息。
RNA二代測序分析檢測