二代測(cè)序突變分析排行

病毒全基因組測(cè)序定：探普生物對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的實(shí)驗(yàn)基于二代測(cè)序技術(shù)。樣本經(jīng)過(guò)核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這3大基本流程后轉(zhuǎn)換成了序列數(shù)據(jù)。先，在核酸純化環(huán)節(jié)，探普提供專門針對(duì)性的核酸純化樣本指南，以提高目的物種的核酸純度和得率，與此同時(shí)探普生物也提供核酸純化服務(wù)。第二，文庫(kù)構(gòu)建環(huán)節(jié)，樣本的核酸具備濃度低，總量少的特點(diǎn)。探普生物專門針對(duì)這一點(diǎn)開發(fā)了超微量核酸文庫(kù)構(gòu)建，可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構(gòu)建成測(cè)序文庫(kù)。第三，生物信息學(xué)分析環(huán)節(jié)。生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的下機(jī)數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點(diǎn)，優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫(kù)，搭載了專門用的的生物信息學(xué)分析流程，可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。

團(tuán)隊(duì)具備普通測(cè)序?qū)嶒?yàn)和分析基礎(chǔ)。二代測(cè)序突變分析排行

DNA病毒基因組的測(cè)序：動(dòng)物、人、植物被特定病毒株侵染、分離到病毒株、連續(xù)傳代的病毒株往往都需要獲得盡量完整的基因組序列來(lái)指導(dǎo)下一步的研究，傳統(tǒng)的sanger測(cè)序需要了解序列、設(shè)計(jì)引物、做很多PCR，往往效率很低，而NGS作為一種無(wú)需特異性引物擴(kuò)增的測(cè)序方式，可以直接從DNA中獲得序列。DNA病毒基因組測(cè)序：如果，1，您的目的是：獲得一種指定DNA病毒盡量完整的序列；2，您可以提供該病毒的中英文名稱；3，您了解樣本中病毒的載量情況、培養(yǎng)狀況、ct值等任一信息。那么，探普為你準(zhǔn)備了完整的下單、樣本準(zhǔn)備方法，經(jīng)過(guò)探普的實(shí)驗(yàn)、測(cè)序、分析，你將獲得：1，1-5Gb測(cè)序數(shù)據(jù)量rawdata；2，一般可獲得95%以上的拼接序列，100kb以上大基因組病毒除外；其他特殊要求如：突變分析、進(jìn)化分析都可直接與技術(shù)支持聯(lián)系。二代測(cè)序原理測(cè)序覆蓋度是反映測(cè)序隨機(jī)性的指標(biāo)之一。

需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的應(yīng)用場(chǎng)景：在探普生物長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行過(guò)程中，我們接觸到的對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。先，從事基因進(jìn)化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會(huì)用到測(cè)序。這種場(chǎng)景一般是用密集的sanger測(cè)序監(jiān)測(cè)某幾個(gè)關(guān)鍵基因，搭載一定頻率的全基因組測(cè)序。這樣的組合省時(shí)省力省經(jīng)費(fèi)，同時(shí)能達(dá)到研究目的。此外，有的單位需要對(duì)傳染病的病原進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和研究，如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組，可能需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序以后，結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù)，達(dá)到研究或者監(jiān)測(cè)疫病的目的。

哪些應(yīng)用場(chǎng)景需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序？在探普生物長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行過(guò)程中，我們接觸到的對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。先，從事基因進(jìn)化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會(huì)用到測(cè)序。這種場(chǎng)景一般是用密集的sanger測(cè)序監(jiān)測(cè)某幾個(gè)關(guān)鍵基因，搭載一定頻率的全基因組測(cè)序。這樣的組合省時(shí)省力省經(jīng)費(fèi)，同時(shí)能達(dá)到研究目的。此外，有的單位需要對(duì)傳染病的病原進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和研究，如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組，可能需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序以后，結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù)，達(dá)到研究或者監(jiān)測(cè)疫病的目的。

想要通過(guò)高通量測(cè)序獲得病毒全序列，需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程.

目前對(duì)我國(guó)首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測(cè)定,分析其進(jìn)化來(lái)源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測(cè)序儀進(jìn)行病毒全基因組測(cè)定.對(duì)獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對(duì)、進(jìn)化樹構(gòu)建和關(guān)鍵位點(diǎn)分析.結(jié)果通過(guò)測(cè)定獲得了病毒全基因組11979nt,該測(cè)定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(＞98％).病毒Gn蛋白C端信號(hào)肽區(qū)存在1個(gè)氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測(cè)定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。

探普生物對(duì)于樣本準(zhǔn)備獨(dú)特的處理方法指南為后續(xù)的分析結(jié)果打下了牢固的基礎(chǔ)。RNA病毒基因測(cè)序分析服務(wù)公司

從事病原流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和研究的工作者需要將病毒全基因組測(cè)序結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù)。二代測(cè)序突變分析排行

全基因組測(cè)序要注意的事項(xiàng)：全基因組測(cè)序是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體的基因組測(cè)序。技術(shù)路線：提取基因組DNA，然后隨機(jī)打斷，電泳回收所需長(zhǎng)度的DNA的片段（0.2~5Kb），加上接頭,進(jìn)行DNA簇（Cluster）制備，后利用Paired-End（Solexa）或者M(jìn)ate-Pair（SOLiD）的方法對(duì)插入片段進(jìn)行測(cè)序。然后對(duì)測(cè)得的序列組裝成Contig，通過(guò)Paired-End的距離可進(jìn)一步組裝成Scaffold，進(jìn)而可組裝成染色體等。組裝效果與測(cè)序深度與覆蓋度、測(cè)序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有：SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測(cè)序深度（Sequencingdepth）是指測(cè)序得到的堿基總量（bp）與基因組大小的比值，它是評(píng)價(jià)測(cè)序量的指標(biāo)之一。測(cè)序深度與基因組覆蓋度之間是一個(gè)正相關(guān)的關(guān)系，測(cè)序帶來(lái)的錯(cuò)誤率或假陽(yáng)性結(jié)果會(huì)隨著測(cè)序深度的提升而下降。測(cè)序的個(gè)體，如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案，當(dāng)測(cè)序深度在50X~100X以上時(shí)，基因組覆蓋度和測(cè)序錯(cuò)誤率控制均得以保證，后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準(zhǔn)確。

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